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基因工程制药-1
geneticengineeringpharmaceutics
2025-2-181
Ø基因工程（GeneEngineering):
l基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工
的.
其基本步骤
Ø(1)提取目的基因.
Ø(2)目的基因与运载体结合.
形成一个重组DNA分子.
Ø(3)将目的基因导入受体细胞.
Ø(4)目的基因的表达.
Ø基因工程技术最成功的成就:用于新型生物技术药
物的研制
2025-2-182
载体DNA
(限制性内切酶切开)目的基因
重组体
宿主细胞
已转化的宿主细胞
繁殖
阳性克隆株
2025-2-183
表达
一、基因工程菌的构建与筛选
（一）工具酶
1、限制性核酸内切酶
Ø是一类能识别特殊核甘
酸序列，并水解DNA分子
的磷酸二酯键,从而切断
双链DNA的核酸水解酶。
Ø主要存在于原核细菌中，
帮助细菌限制外来DNA的
入侵作用。
2025-2-184
4
1）II型限制性内切酶的基本特征
ØⅡ型酶
ü识别位点是一个回文对称
EcoRI的识别序列
结构，并且切割位点也在
这一回文对称结构上。5‘…GCTGAATTCGAG…3’
3‘…CGACTTAAGCTC…5
ü许多Ⅱ型酶切割ＤＮＡ后，
可在ＤＮＡ上形成粘性末ØEcoRI的切割位点
端，有利于ＤＮＡ片段的
重组。
2025-2-185
5
2）核酸内切酶作用后的断裂方式
粘性末端：
2025-2-186
6
平末端：
2025-2-187
2025-2-188
3）同裂酶（isoschizomers)
Ø指来源不同但识别相同靶序列的核酸内切酶。
l同裂酶进行同样的切割，产生同样的末端。但有些同裂
酶对甲基化位点的敏感性不同。
ØExample:
l限制酶HpaⅡ和MspⅠ是一对同裂酶(CCGG)，当靶序列中
一个5-甲基胞嘧啶时HpaⅡ不能进行切割，而MspⅠ可以。
lSmaI(SerratiamarcescensSB)
CCC^GGG
lXmaI(Xanthomonasmalvacaerum)
C^CCGGG
2025-2-189
4）同尾酶（isocaudamer）
Ø指来源不同、识别靶序列不同但产生相同的粘性末
端的核酸内切酶。
•相同的粘性末端称为配伍未端(compatible
end)。
。
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