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第十三章生物实验的基本技术

第一节细胞学实验技术

【知识概要】

一、玻片标本的制作技术

制作玻片标本对认识生物体的形态结构具有重要意义。玻片标本有临时玻片标本

（如涂片、压片、临时装片）和永久玻片标本（如永久装片、切片）。

1．涂片法

涂片法是将材料均匀地涂布在载玻片上的一种制片方法。

涂片材料有单细胞生物、小型藻类、血液、细菌培养液、动植物的疏松组织、精巢、

花药等。

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涂片时应注意：（）载玻片必须清洁。（）载玻片要持平。（）涂层须均匀。涂抹

液滴在载玻片中间偏右，用解剖刀刃或牙签等涂匀。（）涂层要薄。用另一载玻片作推4

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片，沿滴有涂抹液的载玻片面（二载玻片夹角应为°～°）由右向左轻轻推动，涂

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成均匀一薄层。（）固定。如需固定可用化学固定剂或干燥法（细菌）固定。（）染色。

细菌用亚甲基蓝，血液用瑞氏染液。染色液要盖住全部涂面。（）冲洗。用吸水纸吸干7

或烤干。（）封片。长期保存用加拿大的树胶片片。8

2．压片法

压片法是将生物材料置于载玻片和盖片之间，施加一定压力，将组织细胞压散的一

种制片方法。

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压片法的一般过程：（）取材。观察细胞分裂，应选取细胞分裂旺盛、新鲜的组织

细胞为材料。如根尖、茎尖分生组织、骨髓细胞、花药（花粉母细胞）。精巢（精母细

胞）等。（）固定。材料固定可根据需要而定，取材后立即压片观察，可不作单独固定2

处理（与染色同步进行）；取材后不立即视察，可将材料用固定液（一般用醋酸酒精固

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定液）固定。固定～小时（因材料而异）后用％乙醇清洗，保存于％乙醇中，

备用。（）离析。对细胞不易散开材料用水解分离液（如31NHCl或盐酸一酒精液）处

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理，一般处理～，解离后经水漂洗后方能染色。（）染色。染色剂种类很多。

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观察染色体常用醋酸洋红染色液染色。（）压片。将材料放在载玻片上，加一滴清水或

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染液，盖上盖玻片用拇指轻轻压片。（）观察。压片后，即可在显微镜下观察。

3．装片法

装片法是将生物材料采取整体封固制成玻片标本的方法，用此法可制成临时或永久

装片。

装片材料有：微小生物如衣藻、水绵、变形虫、水螅，植物的叶表皮；昆虫的翅、

足、口器，人的口腔上皮细胞等。

装片法制作时应注意：（1）手持载玻片时，应注意持平，或放在平台上。滴水时水

量要适当，以恰好被盖玻片盖满为度。（2）应将材料用解剖针或镊子展开不使重叠，展

平在同一平面上。（3）放盖玻片时，从一侧慢慢盖在水滴上，防止出现气泡。（4）染色

时，将一滴染色液滴在盖玻片的一侧，用吸水纸从另一侧吸引，使盖玻片下的标本均匀

着色。着色后，用同样的方法，滴一滴清水，把染色液吸出后，在显微镜下观察。

二、显微镜基本实验技术

1．低倍镜（4X、10X）的使用方法

显微镜操作主要包括两个方面：（1）光度调节。正确对光是能否成功地观察到物象

的首要条件。对光时，先把聚光器上提，打开可变阑，转动反光镜，这时一边看镜内视

野，一边调节聚光器螺旋，直至视野内得到均匀而明亮的光线。（2）焦距的调节。调焦

时，先把观察的切片，用推进器对正通光孔中央。然后分两步调焦。先用粗调器定焦，

用左眼看目镜，使粗调器慢慢上升，直到能清楚地看到标本为止。随后调节细调器，使

镜筒微微升降，至物象更清晰为止。

2．高倍镜（40X）的使用方法

（1）将在低倍镜中找到的物象欲放大部分移到视野中央