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血涂片染色主讲人:郭丽香
瑞特(氏)(Wright)染色法吉姆萨(Giemsa)染色法复合染色法染料的组成
染料的组成MCL+NaE―――ME↓+NaCL亚甲蓝(碱性)伊红(酸性)瑞特染料瑞特染料+甲醇+甘油-----瑞氏染液甲醇的作用:溶解染料,解离出M+和E-凝固蛋白增加染色效果
细胞着色原理包括物理吸附和化学亲和作用。染色原理
染色原理
成分本质染色原理染色结果血红蛋白、嗜酸性颗粒碱性蛋白(嗜酸性物质)正电荷,碱性物质,易与带负电荷的酸性染料伊红结合被染成粉红色或红色系列RNA、DNA等细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆及嗜碱性颗粒酸性蛋白(嗜碱性物质)负电荷,酸性物质,易与带正电荷的亚甲蓝结合被染成蓝色系列中性颗粒中性物质与酸性染料和碱性染料结合染成紫红色染色原理
操作勿冲洗再加等量或稍多瑞氏染色乙液用洗耳球吹匀,使之与染液充分混匀,并染色5-10分钟直接流水冲洗3-5分钟(切勿先到掉染液)涂片经水洗干燥后待检李四123涂片干燥后加瑞氏染色甲液3-5滴覆盖整个血膜0.5-1分钟
染色结果血膜外观成紫红色。红细胞呈粉红色,细胞核呈紫红色,嗜酸性颗粒呈桔红色,嗜碱性颗粒呈紫黑色。
质量保证瑞特染液质量封闭条件下,染液储存时间愈久,染色效果愈好PH染液偏酸,染色偏红,染液偏碱,染色偏蓝脱色与复染过深,甲醇脱色过浅,复染操作染色时机染液用量混匀染色时间冲洗血涂片染色质量保证
缓冲液的pH6.4-6.8由于蛋白质系两性电解质,所带电荷随溶液pH而定偏酸性环境中下正电荷增多,易与伊红结合,染色偏红偏碱性环境中负电荷增多,易与美蓝或天青结合,染色偏蓝质量保证-PH
染色偏酸,红细胞和嗜酸性粒细胞颗粒偏红,白细胞核呈淡蓝色或不着色。染色偏碱,细胞呈灰蓝色,嗜酸性颗粒可染成暗褐色,甚至紫黑色或黑色。质量保证偏酸合适偏碱
染色时机:未干透的血膜不能染色,否则染色时血膜会脱落。染液用量:以刚好覆盖血膜为宜。染色时间:环境温度越低,细胞数越多,染色时间越长。冲洗:冲洗时不能先倒掉染料,应用流水冲去,以防染料沉淀在血膜上。质量保证-操作
对胞浆染色效果好,特别是中性颗粒,对核着色较差。瑞特(氏)(Wright)染色法对核染色好,但胞质和颗粒较差。吉姆萨(Giemsa)染色法:即以稀释吉姆萨液代替缓冲液。或先用瑞特染色法染色后,再用稀释吉姆萨复染。复合染色法:方法学评价
快速准确科学公正严谨
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