维生素的测定 (3).ppt

概述第55页，共111页，星期日，2025年，2月5日第56页，共111页，星期日，2025年，2月5日第57页，共111页，星期日，2025年，2月5日测定方法三氯化锑比色法紫外分光光度法荧光法气相色谱法高效液相色谱法第58页，共111页，星期日，2025年，2月5日三氯化锑比色法（GB第二法）1．原理在氯仿溶液中，维生素A与三氯化锑可生成蓝色可溶性络合物，在620nm波长处有最大吸收峰，其吸光度与维生素A的含量在一定的范围内成正比，故可比色测定。第59页，共111页，星期日，2025年，2月5日2．适用范围及特点本法适用于维生素A含量较高的各种样品(高于5一l0μg／g)，对低含量样品，因受其他脂溶性物质的干扰，不易比色测定。第60页，共111页，星期日，2025年，2月5日3．测定方法(1)样品处理①皂化（氢氧化钾，乙醇）②提取（乙醚）③洗涤（水，氢氧化钾）④浓缩（无水硫酸钠，三氯甲烷）第61页，共111页，星期日，2025年，2月5日(2)标准曲线的绘制(3)样品测定第62页，共111页，星期日，2025年，2月5日结果计算第63页，共111页，星期日，2025年，2月5日所用氯仿中不应含有水分，因三氯化锑遇水会出现沉淀，干扰比色测定。故在每m1氯仿中应加入乙酸酐1滴，以保证脱水。说明与注意点第64页，共111页，星期日，2025年，2月5日维生素A见光易分解，整个实验应在暗处进行，防止阳光照射，或采用棕色玻璃避光。第65页，共111页，星期日，2025年，2月5日测定结果也可以每100g食品中所含维生素A的国际单位表示，每国际单位维生素A相当于0.3μg维生素A。1μg胡萝卜素=0.167μg视黄醇当量。以往VA的量常用国际单位（IU）表示。1IUVA=0.33μgVA=0.33μg视黄醇当量。第66页，共111页，星期日，2025年，2月5日三氯化锑腐蚀性强，不能沾在手上；三氯化锑遇水生成白色沉淀，因此用过的仪器要先用稀盐酸浸泡后再清洗。第67页，共111页，星期日，2025年，2月5日比色法除用三氯化锑作显色剂外，还可用三氟乙酸、三氯乙酸作显色剂。其中三氟乙酸没有遇水发生沉淀而使溶液混浊的缺点。第68页，共111页，星期日，2025年，2月5日(二)紫外分光光度法1.原理维生素A的异丙醇溶液在325nm波长下有最大吸收峰，其吸光度与维生素A的含量成正比。第69页，共111页，星期日，2025年，2月5日2．适用范围及特点本法的灵敏度较比色法高，可测定维生素A含量低于5μg／g的样品。主要缺点是在维生素A最大吸收波长325nm附近许多其他化合物也有吸收，干扰测定，第70页，共111页，星期日，2025年，2月5日故本法适用于透明鱼油，维生素A的浓缩物等纯度较高的样品。对于一般样品，测定前必须先将脂肪抽提出来进行皂化，萃取其不皂化部分，再经柱层析除去干扰物。第71页，共111页，星期日，2025年，2月5日（三）高效液相色谱法1、原理（GB/T5009.82-2003第一法）皂化、提取样品中的维生素A和维生素E后，用高效液相色谱法C18反相柱将两者分离，用紫外检测器检测，内标法定量。第72页，共111页，星期日，2025年，2月5日测定步骤（1）样品处理（皂化、提取、洗涤、浓缩）（2）标准曲线的制备第73页，共111页，星期日，2025年，2月5日二、β—胡萝卜素的测定

450nm波长处有最大吸收HPLC法（GB/T5009.83）纸层析、柱层析薄层层析法β-胡萝卜素含有两个维生素A1的结构，称为维生素A原。第74页，共111页，星期日，2025年，2月5日第75页，共111页，星期日，2025年，2月5日一、高效液相色谱法1原理试样中的β-胡萝卜素，用石油醚+丙酮(80+20)混合液提取，经三氧化二铝柱纯化，然后以高效液相色谱法测定，以保留时间定性，峰高或峰面积定量。第76页，共111页，星期日，2025年，2月5日二、纸层析法1．原理：以丙酮和石油醚提取食物中的胡萝卜素及其他植物色素；以石油醚为展开剂进行纸层析。胡萝卜素极性最小，移动速度最快，从而与其它色素分开。剪下含胡萝卜素的区带，洗脱后于450nm波长下进行比色，测定。第77页，共111页，星期日，2025年，2月5日4、测定步骤（1）样品提取与洗涤(石油醚）（2）浓缩与定容（3）纸层析（4）比色测定（5）标