噬菌体疗法概论噬菌体分离纯化讲解.pptx

职业教育医学生物技术专业教学资源库噬菌体分离纯化噬菌体疗法概论

噬菌体分离纯化一、噬菌体的分离纯化（一）采样（二）噬菌体的分离纯化（三）噬菌体富集与保存

噬菌体分离纯化一、噬菌体的分离纯化（二）噬菌体的分离纯化1）噬菌体的分离取200μl处理好的样品和100μl菌液加入到5ml半固体中，混合后倒入固体培养基上，铺平等到半固体培养基凝固后，倒置放入培养箱，培养时间及温度根据宿主菌特性决定。

噬菌体分离纯化（二）噬菌体的分离纯化2）噬菌体的纯化用小枪头将单个噬菌斑连同琼脂一同戳起来，放入1ml稀释液中，十/百倍比稀释，一般稀释为10-5-10-6，目的为有单斑。吸取100μl稀释液和100μl细菌铺双层平板连续纯化3-5次，直至平板上噬菌斑大小一致。一、噬菌体的分离纯化

噬菌体分离纯化噬菌体的分离纯化用到的工具及过程一、噬菌体的分离纯化

噬菌体分离纯化（三）噬菌体的富集与保存一、噬菌体的分离纯化（1）双层平板法纯化后，挑噬菌体单斑到1ml稀释液中，混匀，取100μl与100μl宿主菌混合铺双层平板，在培养箱培养基形成“透明空板”。在培养基中加入5mlSM液，低温摇床60rpm条件下，放置2-6h。将培养基中SM液转移到EP管中，5000rpm离心5min，过0.22um滤膜。优点：滴度高

噬菌体分离纯化（三）噬菌体的富集与保存一、噬菌体的分离纯化（2）单层固体平板法按宿主菌与噬菌体总体积500μl制备，混合物涂布在固体平板上并风干，培养至完全裂解（细菌代时20min，培养3-6h），在培养基中加入噬菌体稀释液3ml左右，收集液体，离心过膜。优点：含可溶性琼脂少，保质期长缺点：产量低

噬菌体分离纯化（三）噬菌体的富集与保存一、噬菌体的分离纯化（3）噬菌体的保存每个冻存管中加入750μl新富集的噬菌体，后加入750μl冻存液，一次同时保存两份。置于4℃或者80℃，不同噬菌体保存的温度不同。

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