吸光光度法讲解.ppt

*物质的颜色由物质与光的相互作用方式决定。●人眼能感觉到的光称可见光，波长范围是：400~760nm。●让白光通过棱镜，能色散出红、橙、黄、绿、蓝、紫等各色光。单色光：单一波长的光●复合光：由不同波长的光组合而成的光，如白光。●光的互补：若两种不同颜色的单色光按一定比例混合得到白光，称这两种单色光为互补色光，这种现象称为光的互补。*物质的颜色：是由于物质对不同波长的光具有选择性吸收而产生。

即物质的颜色是它所吸收光的互补色。*物质的本色无色溶液：透过所有颜色的光有色溶液：透过光的颜色黑色：吸收所有颜色的光白色：反射所有颜色的光*朗伯?比尔定律只适用于单色光。在光度分析仪器中，使用的是连续光源，用单色器分光，用狭缝控制光谱带的密度，因而投射到吸收溶液的入射光，常常是一个有限宽度的光谱带，不是真正的单色光，也就是得到的入射光实际上是具有某一波段的复合光。由于非单色光使吸收光谱的分辨率下降，因而导致了对朗伯?比耳定律的偏离。为了克服非单色光引起的偏离，应使用比较好的单色器，从而获得纯度较高的“单色光”，使标准曲线有较宽的线性范围。此外，还应将入射光波长选择在被测物的最大吸收波长处。不仅是因为在λmax处测定的灵敏度最高，还由于在λmax附近的一个小范围内吸收曲线较为平坦，使λmax附近各波长光的ε值大体相等，因此在λmax处由于非单色光引起的偏离要比在其他波长处小得多。反射现象入射光通过折射率不同的两种介质的界面时，有一部分光被反射损失，使吸光度值偏大，导致偏离吸光定律。散射现象当光波通过溶液时，溶液中的质点对光具有散射作用，有一部分光会因散射而损失使吸光度值偏大，导致偏离吸光定律。（4）非平行光朗伯比尔定律适用条件是入射光平行。如果入射光不平行将导致光束的平均光程大于吸收池的厚度L，使实际测得的吸光度大于理论值。*朗伯-比耳定律是建立在吸光物质质点之间没有相互作用的前提下，即只适用于较稀的溶液。当溶液浓度较高时，吸光物质的分子或离子间的平均距离减小，从而改变物质对光的吸收能力，即改变物质的摩尔吸收系数。如溶液浓度增加，其相互作用增强，致使在高浓度范围内摩尔吸收系数不恒定而使吸光度与浓度之间的线性关系被破坏，导致光吸收定律偏离。因此，在测定时应选择适当的浓度范围，使吸光度读数在标准曲线的线性范围内。（2）溶液中的吸光物质常因解离、缔合、配合形成新化合物或互变异构等化学变化而使浓度发生变化，因而也能导致偏离朗伯-比尔定律。（3）不同类型的溶剂对吸光性物质的吸收峰，最大吸收波长产生影响，还对待测物质的理化性质产生影响，导致偏离光的吸收定律。**一测量条件的选择1．测定波长的选择为使测定结果有较高的灵敏度和准确度，通常选择最大吸收波长λmax的光作为入射光，这称为“最大吸收原则”。λmax处有干扰时，可不选择最大吸收波长。可选用灵敏度稍低，但能避免干扰的非最大吸收处的波长，但应注意尽量选择摩尔吸光系数值变化不太大区域内的波长。选择入射光波长的原则是“吸收最大、干扰最小”。*2．吸光度范围的选择当透光率T为36.8，即吸光度A为0.434时，测量的相对误差最小。控制浓度或选择吸收池厚度使吸光度A在0.2～0.8之间。*二、参比溶液（空白溶液）的选择主要是消除溶液中其他组分对光的吸收等带来的影响。1.溶剂参比待测组分与显色剂有吸收，其它试剂无吸收，用纯溶剂(水)作参比溶液。2.试剂参比试剂、显色剂有吸收而试液无吸收时，以不加试液的试剂、显色剂作为参比溶液。测试时多数情况都是采用试剂溶液作参比*3.试样参比试样溶液有吸收，而试剂和显色剂无吸收，以不加显色剂的样品溶液作参比液。4.褪色参比试液和显色剂有吸收，可加掩蔽剂掩蔽被测试液为参比溶液。*三、显色反应条件的选择显色反应：将试样组分转变成有较强吸收的有色化合物的反应。显色剂：与被测组分化合生成有色物质的试剂。*显色反应的选择选择性好，干扰少或易消除灵敏度要足够高，有色物质ε应大于104有色化合物的组成恒定，化学性质稳定，符合一定的化学式对比度要大。有色化合物与显色剂之间的色差要大，两者的吸收峰波长之差Δλ大于60nm显色反应的条件要易于控制*显色反应条件的选择显色剂用量溶液酸度显色时间显色温度干扰物质及其消除方法*山东中医药高等专科学校ShandongCollegeOfTraditionalChineseMedicine山东中医药高等专科学校ShandongCollege