样品的前处理方法.pptVIP

SPE小柱的种类反相正相离子交换固定相非极性极性带电荷溶剂从极性到非极性从非极性到极性PH或离子强度（低到高）?根据SPE小柱的种类及样品的性质，选洗脱强度不同的溶剂把样品分开?让样品的各组份在固定相上吸附、解吸附，或不与固定相作用第一步：让所感兴趣的样品留在小柱，杂质通过小柱第二步：用不同极性的溶剂，使所感兴趣的样品通过小柱SPE小柱使用方法萃取２进样准备萃取１各种SPE小柱（一）正相使用方法可先用6到10倍柱体积的非极性溶剂平衡加入样品用非极性溶剂洗脱不想要的组份用极性溶剂洗脱第一组感兴趣的组份用极性更强的溶剂洗脱剩下的感兴趣的组份在不同条件下，有些填料可以用于反相或离子交换，如∶NH2/CN确认回收率各种SPE小柱（二）反相使用方法可先用6到10倍柱体积的甲醇或乙腈活化，再用6到10倍柱体积的水或缓冲液平衡，不要让小柱干了样品溶解在强一些极性的溶剂中加入样品用强极性溶剂洗脱不想要的组份用极性弱些的溶剂洗脱第一组感兴趣的组份用极性更弱的溶剂洗脱剩下的感兴趣的组份确认回收率各种SPE小柱（三）离子交换使用方法可先用6到10倍柱体积的去离子水或弱缓冲液平衡，样品溶解在去离子水或弱缓冲液中加入样品用弱缓冲液洗脱不想要的组份用强一些缓冲液（改变pH或离子强度）洗脱第一组感兴趣的组份用更强的缓冲液洗脱剩下的感兴趣的组份确认回收率SPE方法开发的几个关键因素文献查阅流速控制同色谱理论：以10ml/min润湿小柱，1～5ml/min加载样品离子交换填料或固定相少于100mg的小柱，用更低的流速加载样品123以1～5ml/min流速洗脱样品注意样品本底的不同注意载荷量及加样方式4SPE小柱的方法开发植物：花、叶、茎、根、果实1体液：尿、血液、唾液、胃液、胆汁等2生物样品动物毛发肌肉3组织器官：心、肝、肺、脑、胃、肾、胰腺等微生物4四、生物样品的制备技术生物样品中需分析的组分：植物体内—营养成分、农药残留等动物体内—药物及代谢产物、糖类及有关化合物、脂类、维生素、核甘、核甘酸及其衍生物、磷酸酯类化合物、固醇类化合物、氨基酸、多肽、蛋白及其衍生物、某些生物大分子生物样品中待测组分存在的形式及处理方法待测组分存在于体液或细胞外时：用萃取的方法提取、浓缩制备样品用沉淀的方法除去干扰组分（蛋白质、DNA、多糖）待测组分存在于生物细胞内：破碎细胞，释放待测组分，再用萃取或沉淀等方法制备样品注意采样部位的准确，特别是动物的组织器官，一定要认准生物样品一般都有一定的生物活性，样品采集后要立即处理生物样品的采集大部分可以在实验室内进行，采样工具要消毒，最好在无菌的条件下采样注意样品的代表性、典型性和适时性采集生物样品时注意事项：1.生物样品的采集1根据样品的不同，采用不同的破碎方法：2动物的胰脏、肝脏、脑组织一般比较柔软，用普通的匀浆器研磨3肌肉及心脏组织较柔韧，要先绞碎再作成匀浆6对具有坚韧细胞壁的微生物，常用自溶、冷热交替、加砂研磨、超声波和加压处理等方法。5含纤维较多组织则必须在捣碎器内破碎或加砂研磨4植物组织用一般碎磨法2.细胞的破碎细胞破碎方法的分类3.生物大分子的提取提取生物大分子样品时条件的选择：溶剂常用的溶剂有水、稀酸、稀碱、稀盐等，也可以采用不同比例的有机溶剂，如：乙醇、丙酮、氯仿、四氯化碳选择溶剂时要注意物质的溶解性，如极性物质易溶于极性溶剂；碱性物质易溶于酸性溶剂；温度升高时一般溶解度相应增大；远离等电点时溶解度增大02pH值在稳定的范围内，pH选择在偏离pI的两侧注意测量pH值的准确性，误差不应超过0.1温度一般提取温度在5℃以下除此之外，还应考虑溶剂的离子强度、介电常数等对提取效果的影响01前提条件：待测组分热稳定性好，而其它易产生热变性01该法最简单，但只能除去热变性蛋白02加热法4.蛋白质的去除原理：利用不同蛋白质在高浓度的盐溶液中溶解度有不同程度的降低来沉淀去除蛋白质常用的中性盐有：硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、氯化钠、磷酸钠影响盐析的条件盐的饱和浓度pH的选择蛋白质的浓度温度的影响123盐析法4.蛋白质的去除（续）有机溶剂沉淀法01蛋白质的沉淀和溶解与溶剂的介电常数有关常用的有机溶剂：乙醇、丙酮等电点沉淀法02原理：利用蛋白质在等电点时溶解度最低，用酸、碱调pH值，使蛋白沉淀出来缺点：蛋白沉淀不完全4.蛋白质的去除（续）膜分离技术：超滤、反渗透析、电渗析、微孔过虑、气体渗析、超精密过虑等超滤法的特