噬菌体疗法概论噬菌体蛋白质合成翻译跳跃讲解.pptx

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噬菌体蛋白质合成--翻译跳跃翻译跳跃许多噬菌体利用在特定位点偶然地“翻译跳跃”一两个核苷酸产生特定蛋白质的变异体。噬菌体T4基因60编码区中间有50个碱基不翻译。这取决于mRNA的顺式作用信号、核糖体蛋白L9、一对GGA密码子47碱基和相应的甘氨酰tRNA。这段结构转入其他基因，也会产生类似的“翻译跳跃”。

基于噬菌体翻译的应用技术：核酸适配体与SELEX核酸适配体(aptamer)是一类具有特异性识别功能的ssDNA或者RNA核酸分子，核酸分子折叠形成特定三维结构，与生物靶标高亲和力、高特异性结合，结合靶标的亲和力与特异性类似于单克隆抗体。其优点是不易受pH、温度等环境因素影响而变性，价格便宜；可在体外筛选；没有免疫原性和毒性，可通过化学合成制备、改造与标记；化学稳定性好，能可逆变性与复性，可通过酶扩增、剪切等。这个概念首先来自研究T4DNA聚合酶与其mRNA序列的翻译起始区(translationinitiationregion)前的特定环结合，抑制翻译。噬菌体蛋白质合成--翻译跳跃

在编码该环状区域的8核苷酸随机化，利用T7RNA聚合酶转录构建物，研究T4DNA聚合酶与这个含有65536变异体的RNA库的结合特异性。含有野生型T4序列的RNA结合最好，其他非野生型序列的结合都较差。基于此，利用体外筛选技术“指数富集的配体系统进化技术”，从核酸分子文库中得到寡核苷酸片段。噬菌体蛋白质合成--翻译跳跃

随机RNA或DNA区一般有40个核苷酸，两端是恒定的末端固定引物，用于PCR扩增所有筛选出来的101?序列。这样可以产生短的、与酶活性位点结合的ssDNA或ssRNA分子，作为抑制剂或者激活剂。利用该技术发现了全局性调控细胞应答的配体如SAM、鸟嘌呤、腺嘌呤、硫胺素焦磷酸、黄素单核苷酸和维生素B??。噬菌体f29编码的RNA选择性结合ATP,是包装过程所必需的。SELEX筛选获得的ATP-结合适配体非常类似于f29噬菌体的包装RNA的核心部分。噬菌体蛋白质合成--翻译跳跃

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