25病毒感染的检查方法与防治原则课件.ppt

25病毒感染的检查方法与防治原则特点:?对多种病毒敏感?生长能力有限,获取成本高?可携带潜伏病毒应用:?病毒分离与鉴定?病毒学实验研究?不能用于制备疫苗①原代培养细胞（primaryculturalcells)25病毒感染的检查方法与防治原则体外分裂50~100代仍保持二倍染色体数目的单型细胞特点:?对多种病毒敏感?不带异种蛋白(人源性)?不带病毒,无致瘤潜能应用:?病毒分离与鉴定?病毒学实验研究?制备疫苗②二倍体细胞株(diploidcellstrain)fibroblasticcells25病毒感染的检查方法与防治原则③传代细胞系(continuouscellline)特点:?对多种病毒敏感性高?繁殖能力强,传代时间长?有致癌危险(来源于癌细胞或突变的二倍体细胞株)应用:?病毒分离与鉴定?病毒学实验研究?不能用于制备疫苗能在体外无限传代的细胞系。如HeLa,Hep-2epithelioidcells25病毒感染的检查方法与防治原则4.病毒的分离培养与鉴定:?病毒的分离培养?病毒的鉴定?病毒数量及感染性测定25病毒感染的检查方法与防治原则病毒鉴定：?病毒在细胞中增殖的指标?病毒形态学鉴定?病毒抗原鉴定?病毒基因鉴定25病毒感染的检查方法与防治原则⑴细胞病变效应(cytopathiceffect,CPE)病毒在敏感细胞内增殖引起的光镜下可见的细胞病理改变。25病毒感染的检查方法与防治原则①CPE：病毒感染细胞发生形态改变25病毒感染的检查方法与防治原则SyncytiumformationincellculturecausedbyRSV(top),andmeaslesvirus(bottom).②CPE：病毒感染细胞与邻近细胞融合25病毒感染的检查方法与防治原则③CPE：形成包涵体（inclusionbody）25病毒感染的检查方法与防治原则Syncytialformationcausedbymumpsvirusandhaemadsorptionoferythrocytesontothesurfaceofthecellsheet.⑵红细胞吸附（hemadsorption,HAd）受染细胞膜表面血凝素（HA）＋RBC表面HA受体25病毒感染的检查方法与防治原则⑶干扰现象（interference）风疹病毒＋人胚肾细胞病毒增殖，CPE（－）埃可病毒＋人胚肾细胞病毒增殖，CPE（＋）＋人胚肾细胞风疹病毒？埃可病毒CPE(-)——埃可病毒(-)风疹病毒(+)CPE(+)——埃可病毒(+)风疹病毒(-)25病毒感染的检查方法与防治原则4.病毒的分离培养与鉴定:?病毒的分离培养?病毒的鉴定?病毒数量及感染性测定25病毒感染的检查方法与防治原则病毒数量及感染性测定：蚀(空)斑形成试验50%组织细胞感染量病毒总量(活病毒+死病毒)：感染性病毒量:血凝试验25病毒感染的检查方法与防治原则蚀(空)斑形成试验（plaqueassay）原理：适当浓度的感染性病毒在覆盖琼脂的细胞层上产生可见和可数的局部病灶称为蚀斑。一个蚀斑是由一个感染性病毒颗粒增殖而形成的，由蚀斑的数目可以计算出原始标本中感染性病毒的含量。PLAQUEASSAYPLAQUEASSAYPLAQUEASSAYPLAQUEASSAYPLAQUEASSAYPLAQUEASSAY分别为10-1、10-2、10-3倍稀释度的HCMV病毒液感染的HEL细胞蚀(空)斑形成试验（plaqueassay）25病毒感染的检查方法与防治原则用途：?测定感染性病毒量单位:PFU(plaqueformingunit)/ml由一个感染性病毒颗粒增殖而形成的一个空斑称为空斑形成单位。?分纯病毒蚀(空)斑形成试验（plaqueassay）25病毒感染的检查方法与防治原则50%组织细胞感染量

(50%tissuecultureinfectiousdose,TCID50)概念:测定病毒感染细胞后引起50%细胞病变或死亡的最小病毒量。方法:一般是将病毒悬液作10倍的系列稀释，分别接种细胞，经一定时间后观察