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循环肿瘤细胞检测技术规范

Technicalspecificationsfordetectionofcirculatingtumorcell

目 次

前言 II

范围 1

规范性引用文件 1

术语和定义 1

人员要求 1

检测技术要求 1

标本采集 1

标本处理 2

检测方法 2

结果判定与报告 2

质量控制与保证 3

检测系统性能验证 3

分析前质量管理 3

分析中质量管理 3

分析后质量管理 4

附录A（资料性）CTC检测系统分析性能参数验证方法示例 5

参考文献 7

I

II

循环肿瘤细胞检测技术规范

范围

本文件规定了循环肿瘤细胞检测的检测人员要求、技术要求和质量控制要求。

本文件适用于医疗机构、第三方检测机构和相关科研机构等单位开展循环肿瘤细胞检测。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T42060医学实验室样品采集、运送、接收和处理的要求CNAS—GL039—2019分子诊断检验程序性能验证指南

术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

循环肿瘤细胞circulatingtumorcell；CTC

从实体肿瘤病灶（原发灶或转移灶）脱落并进入外周血液循环的肿瘤细胞。

注：本文件不适用于非实体肿瘤。

3.2

分子分型molecularclassification

利用核酸、蛋白、代谢物等分子标志物对CTC进行亚型分析。

人员要求

实验室应配置检验医学、病理学或临床医学相关背景知识的技术人员，CTC检测和报告岗位的技术人员应相对固定。

实验室应建立技术人员培训与考核制度，CTC检测人员经过理论和操作实践的培训与考核后，方可进行CTC项目检测。

实验室应定期开展技术人员操作技能考核和检测能力比对，如根据典型和非典型CTC检测图谱开展人员能力比对等。

实验室应建立CTC检测人员的培训档案，记录培训时间、培训内容、考核结果等，并定期对培训档案、检测人员资质进行审查。

检测技术要求

标本采集

检测标本类型应为抗凝全血。

采血部位和采集时间点应根据诊疗方案、治疗周期、研究目的等实际情况选择，治疗或研究的全过程中标本采集条件应相对固定。

1

应优先选择检测方法配套或推荐的采血管类型。无明确指定时，可根据检测目的、检测时长和保存剂的特点选择经医疗器械注册的采血管。

采集要求应依据GB/T42060的规定执行，包括但不限于：

标本采集人员应告知受检者在标本采集前一天清淡饮食，且不宜饮酒；

应采用质量合格的采血管，并确认在效期范围内；

不可在输液侧或大量补液后立即采血；

采血时应在负压作用下引导血液流入采血管，不应过度拉伸压脉带，采血时间不宜超过1min。

标本处理

实验室应建立并执行标本接收、检测、存储和销毁制度。

血液标本采集后应立即送检。不能立即送检时，应按照检测方法要求的条件保存，并在限定时间内转移至实验室进行处理。

应设定标本检测完成后的保存期限和保存条件。标本保存期满后，应按照感染性医疗废弃物进行销毁。

检测方法

总体要求

CTC检测可分为CTC分离与富集、鉴定、下游分析等步骤，检测参数包括CTC数量、形态或功能表型、分子特征等。

应结合具体的肿瘤类型和检测目的选择适宜的检测方法，并充分评估所选方法的分析性能，包括但不限于回收率、检测范围和检测限、精密度及抗干扰能力等。

CTC检测方法选择应考虑以下要求：

能够高特异性识别CTC，准确区分肿瘤细胞与非肿瘤细胞；

具有高灵敏度，可检测出≤10个CTC/5mL全血；

具有较好的纯度，能最大程度地减少非肿瘤源性细胞污染；

具备良好的可重复性；

能够检测出不同表型CTC，包括上皮型、间质型及上皮-间质混合型等；

具备多参数分析能力：能够检测CTC的多种生物学特性，如表面分子、基因突变、表达谱等；

如需进行单细胞测序、细胞培养等，分离的CTC应保持生物学活性。

分离和富集

应根据技术原理和特点、应用目的和后续鉴定与分析的要求，选择适宜的分离和富集方法。

应根据所选分离和富集方法的要求，确定是否需要预先进行红细胞裂解和去除白细胞等处理。

如需标本标记，应选择特异性结合肿瘤细胞表面标志物的抗体/探针。孵育时，抗体/探针应与肿瘤细胞充分接触，并在适当的温度下进行反应。

分离和富集系统应具有高捕获率、高灵敏度和高特异性。有批量检测需求时，还应兼顾设备富集速率和检测通量大小的要求。

鉴定和下游分析

富集后可利用肿瘤细胞特异性蛋白质、RNA、DNA表达以