生物技术概论：细胞工程.ppt

学习要求学习掌握植物细胞、组织的培养方法了解原生质体制备与细胞融合技术了解单倍体植物育种的优势3.2.1植物组织培养植物组织培养的基本过程芽、根离体的植物器官、组织去分化愈伤组织再分化植物体培养胚状体高浓度生长素消毒传代培养(subculture)：悬浮细胞：移取一部分细胞到新的培养基中。贴壁细胞：酶解法（0.25%胰酶）消化细胞，收集（离心）细胞，接种于新的培养基中。细胞的冻存操作简便，保存期长液氮保存法：细胞冻存液：基础培养液+血清+DMSO（甘油）梯度降温：-4℃,30min-20℃，2h-80℃，过夜液氮污染源治理方法细菌青霉素（200U/mL),链霉素（200μg/mL)真菌制霉菌素（100U/mL)支原体卡那霉素（100μg/mL)细胞、组织培养污染的防治解离液3.2.2动物细胞融合与单克隆抗体细胞融合：又称细胞杂交，在体外将不同种生物或同种生物的不同类型的细胞通过无性方式融合成杂合细胞的技术，可以重新组合两亲本细胞的遗传信息。动物细胞融合的诱导方法（1）病毒诱导1958年日本冈田善雄发现灭活的仙台病毒诱导艾氏腹水瘤细胞融合成多核细胞。（2）化学诱导---聚乙二醇（PEG）1974年，高国楠用PEG成功诱导植物细胞原生质体融合；1975年，Pontecorvo用PEG法融合动物细胞取得成功。培养液洗涤离心筛选鉴定双亲本细胞PEGpH7.4-8.0融合细胞团再生杂合细胞摇匀，静置动物细胞融合的诱导方法(3)物理诱导---电激法将双亲本细胞溶液混合（1:1），施以交流电，细胞在电场力作用下排列成串珠状，瞬间施加高电脉冲，细胞膜被击穿发生融合。淋巴细胞杂交瘤产生单克隆抗体1975年Milstein（阿根廷）和Konler（英国）将小鼠骨髓瘤细胞与羊红细胞免疫过的小鼠淋巴细胞融合，得到能无限增殖又能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。由于这一具有伟大生物学意义的工作，他们获得1984年诺贝尔医学及生理学奖。理论基础每种B淋巴细胞产生一种针对特异性抗原决定簇的抗体，B淋巴细胞在体外不能无限增殖；细胞融合肿瘤细胞在体外可以无限增殖单抗隆抗体制备过程将B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合（PEG）杂合细胞培养及杂交瘤细胞筛选特异性抗原免疫实验动物HAT培养液筛选杂合细胞单克隆抗体的大量制备单克隆抗体的应用（1）检验医学诊断试剂病原微生物抗原、肿瘤抗原、免疫细胞抗及细胞因子检测（2）肿瘤的导向治疗（3）蛋白质的提纯解离液3.2.3细胞核移植与动物克隆（1）异种细胞核质关系研究（2）动物克隆——细胞核遗传全能性早期胚胎细胞核移植克隆哺乳动物1952年，Briggs将豹纹蛙的囊胚细胞核移入去核的同种蛙卵中，部分异核卵发育成个体。此后，多种哺乳动物通过此技术被成功克隆。成熟的体细胞核移植克隆哺乳动物1996年7月5日，Dr.Wilmut的团队在英国爱丁堡市罗斯林研究所成功用体细胞克隆出Dolly羊，发表在1997年2月27日的Nature上。体细胞克隆哺乳动物基本途径取出体细胞核未受精卵去核异核卵早期胚胎化学或电激诱导融合产下幼体假孕状态植入代孕母体子宫中体外发育2004年2月15日，美国爱达荷大学的研究人员在西雅图的美国科学年会上展示三头克隆骡子世界首例成年体细胞克隆水牛2005年3月17日在广西大学“863计划”良种牛南方繁殖中心诞生2005年4月24日韩国科学家培育出首只克隆狗“史纳皮”（snuppy）经中国农业大学李宁教授领导的课题组一年多的科技攻关，2005年8月5日，我国第一头体细胞克隆猪终于在河北省三河成功诞生2005年12月8日中国科学院动物研究所用山羊克隆的一只亚洲黄