酶的分离工程 (2).ppt

*上样样品处理：(1）溶解A调整浓度B盐CpH(2)过滤：除去不溶物流速：根据样品浓度与吸附速度而定上样量：80%吸附容量第127页，共141页，星期日，2025年，2月5日*淋洗（去除残留在介质中的杂质）盐浓度pH表面活性剂（0.1-0.5%)淋洗体积：根据流出液杂蛋白浓度而定防止产物丢失又要除去杂质第128页，共141页，星期日，2025年，2月5日*洗脱方法按操作方式a恒定洗脱b分步洗脱c梯度洗脱按洗脱机理专一性洗脱、非专一性洗脱添加剂：乙二醇,NaCNS、脲素、盐酸胍洗脱体积：5倍床体积第129页，共141页，星期日，2025年，2月5日*恒定洗脱第130页，共141页，星期日，2025年，2月5日*分步洗脱第131页，共141页，星期日，2025年，2月5日*(c)梯度洗脱第132页，共141页，星期日，2025年，2月5日*清洗与再生弱酸：HAC碱：氨水促溶剂：1-3MKCNS、6-8M尿素、6M盐酸胍极性溶剂：20%乙醇表面活性剂：吐温-80缓冲液平衡第133页，共141页，星期日，2025年，2月5日*第134页，共141页，星期日，2025年，2月5日*第135页，共141页，星期日，2025年，2月5日*薄层层析：把支持物均匀涂布于支持板(常用玻璃板，也可用涤纶布等)上形成薄层，然后用相应的溶剂进行展开。根据作为固定相的支持物不同，分为薄层吸附层析(吸附剂)、薄层分配层析(纤维素)、薄层离子交换层析(离子交换剂)、薄层凝胶层析(分子筛凝胶)等。一般实验中应用较多的是以吸附剂为固定相的薄层吸附层析。

第95页，共141页，星期日，2025年，2月5日*吸附剂的选择：要求吸附剂（支持剂）的粒度更细，一般应小于250目，并要求粒度均匀。用于薄层层析的吸附剂或预制薄层一般活度不宜过高，以Ⅱ～Ⅲ级为宜。展开距离则随薄层的粒度粗细而定，薄层粒度越细，展开距离相应缩短，一般不超过10厘米，否则可引起色谱扩散影响分离效果。第96页，共141页，星期日，2025年，2月5日*展开剂的选择：当吸附剂活度为一定值时（如Ⅱ或Ⅲ级），对多组分的样品能否获得满意的分离，决定于展开剂的选择。中草药化学成分在脂溶性成分中，大致可按其极性不同而分为无极性、弱极性、中极性与强极性。但在实际工作中，经常需要利用溶剂的极性大小，对展开剂的极性予以调整。

第97页，共141页，星期日，2025年，2月5日*薄层层析的基本操作：①.薄层板的制备②.样品的预处理③.点样、展层与显色④.影响Rf的主要因素⑤.薄层色谱法的应用第98页，共141页，星期日，2025年，2月5日*常用层析介质氧化铝：它是一种多孔性、高分散度固体（1）有很大的比表面积，其微孔表面具有吸附性能。（2）分子式Al2O3简单，空间形态复杂，8种以上的形态（3）同一形态宏观结构性质如密度、孔隙率、孔径分布、比表面积等存在差异（4）吸附量与含水量关系很大制备：由氢氧化铝加热脱水得到的。第99页，共141页，星期日，2025年，2月5日*吸附基团：铝离子种类：碱性：由氢氧化铝高温脱水，用于碱性稳定的溶质酸性：碱性氧化铝经盐酸洗涤，用于在酸性稳定的溶质中性：碱性氧化铝经水洗后活化制得应用：有机溶剂中分离天然成分第100页，共141页，星期日，2025年，2月5日*硅胶硅胶是由多聚硅酸经分子间脱水而形成的一种多孔性物质（1）化学组成SiO2.XH20，（2）属于无定形结构，基本结构质点为Si—O四面体，相互堆积形成硅胶的骨架。质点间的空间即为硅胶的孔隙。（3）硅胶中的水以羟基的形式和硅原子相连而覆盖于硅胶表面。第101页，共141页，星期日，2025年，2月5日*硅胶的分类（常以孔径大小来分），(1)特细孔硅胶(0.8nm以下)(2)细孔硅胶（1.5—2.0nm)(3)中孔硅胶(4.0一5.0nm)(4)粗孔硅胶(10.nm以上)应用：吸附层析剂与分配层析剂优先吸附极性分子及不饱和的碳氢化合物，用于天然产物分离，可用在水溶液中或有机溶剂中第102页，共141页，星期日，2025年，2月5日*二亲和层析亲和层析的概念基质及其活化亲和层析柱操作系统第103页，共141页，星期日，2025年，2月5日*1亲和层析概念亲和层析是利用生物体内存在的特异性相互作用的分子对而设计