05_动物胚胎移植技术及体外受精课件.ppt

05_动物胚胎移植技术及体外受精四、体外受精技术环节卵母细胞的获得和体外成熟精子的体外获能成熟卵母细胞与获能精子的体外受精受精卵的体外培养受精卵的移植05_动物胚胎移植技术及体外受精体外受精获能次级卵母细胞

减数第二次分裂中期05_动物胚胎移植技术及体外受精1．卵母细胞的获得与体外成熟1）卵细胞的采集方法获得足够数量的卵母细胞是生产试管动物的前提（1）从屠宰场家畜卵巢中采集（2）从超数排卵的卵巢获得卵泡,借助腹腔镜，手术法取卵（3）阴道超声波监视穿刺法直接从牛卵巢收集卵母细胞和内窥镜借助套筒穿刺阴道穹隆获得05_动物胚胎移植技术及体外受精2）卵母细胞的成熟未成熟的卵母细胞的核在细胞中央，成熟过程中迁移到动物极质膜下，核变得膨大，改称发生泡，接着进行第一次成熟分裂，减数分裂的完成标志着卵母细胞核的成熟（1）细胞核成熟05_动物胚胎移植技术及体外受精（2）细胞质的成熟显著的蛋白质合成发生在生发泡破裂前后，这些新合成的蛋白质不仅与卵细胞自身成熟有关（激活成熟促进因子），而且与卵母细胞输精后的发育能力直接有关，所以细胞质成熟的质量如何直接影响到早期胚胎的发育能力胞质成熟主要表现为细胞器变化和纺锤体的形成卵母细胞成熟后期细胞器完成重新组装，如高尔基体消失，线粒体分布核的周围，胞质内有PAS阳性的囊膜和脂滴05_动物胚胎移植技术及体外受精（3）细胞膜和透明带的成熟细胞膜稳定性发生改变，膜微绒毛发生重排，表现密集而有弯曲，并从透明带内退出或断裂透明带外层呈网状，变软05_动物胚胎移植技术及体外受精2、体外获能指精子在体外获得受精能力的过程包括在体外环境中除去精浆和精子表面吸附的大分子物质，减少表面阴性电荷，提高膜流动性，增加精子呼吸率和加快运动幅度等一系列生理生化过程精子体外获能是体外受精技术的关键环节，主要包括精子的洗涤和添加特定成分Brackett（1982）以高离子强度液处理使精子获能钙离子在精子获能时起关键作用，能较快的诱发精子超活化运动和顶体反应氨基多糖（GAGs）是牛精子获能的主要物质，可促进对钙离子的吸收，诱发顶体反应。如肝素也可使精子获能，但同样是一个钙离子依赖的过程血清白蛋白（BSA）也可诱发精子获能。可能作为Zn离子融合剂引起PLA2的表达，或者在获能中去除精子膜上的胆固醇05_动物胚胎移植技术及体外受精3、体外受精体外受精是以正常体内受精的研究为基础的，尽可能给精—卵提供一个适宜的共培养体系是研究体外受精的目的受精成功的标志是看受精卵是否可发育至囊胚期阶段多精子受精一直是体外受精的一个难点05_动物胚胎移植技术及体外受精4、受精卵的体外培养受精卵要在体外条件下培养发育一段时间，再移植到受体子宫内，因此，“试管动物”实际上要在体外进行三个阶段的培养：第一阶段是卵子成熟培养和精子获能培养第二阶段是受精培养第三阶段才是受精卵早期发育培养05_动物胚胎移植技术及体外受精05_动物胚胎移植技术及体外受精5、存在的问题体外受精的效率有待提高体外培养体系有待进一步完善基础理论研究有待加强***05_动物胚胎移植技术及体外受精受精卵移植一般供体为良种或优良个体，而受体为生产性能较差的个体或品种。“借劣质动物之腹怀优秀个体之胎”7）胚胎移植选择供体母牛受体母牛……同期发情处理……超数排卵供体公牛配种冲卵质量检查、培养胚胎移植妊娠检查分娩（胚胎移植的犊牛）胚胎移植的基本程序05_动物胚胎移植技术及体外受精8)胚胎移植的应用范围在家畜改良方面的应用在特定品种扩繁上的应用在动物生物多样性上的应用其它方面应用：转基因动物、性别控制、体外受精05_动物胚胎移植技术及体外受精在家畜改良方面的应用人工授精技术可成几十到几百倍地提高了优秀种公畜的配种效能，但对优秀母畜来说，受其产仔数和世代间隔的限制，尤其是牛羊等繁殖力较低的畜种更是如此通过超数排卵和胚胎移植技术（multipleovulationandembryotransfer:MOET)牛羊的生长性状年遗传进展可比正常繁殖提高80%和70%；产奶性状提高33%05_动物胚胎移植技术及体外受精在特定品种扩繁上的应用牛羊等低繁殖力家畜，从引进到形成一个纯种群体需要7-8个世代，15-20年，而采用MEOT法，一次就可获得一个纯种群体80年代初，美、澳、新从欧洲引进的大型肉牛品种均采用胚胎移植技术扩繁2000年前后，我国的波尔山羊也是采用胚胎移植进行扩繁的05_动物胚胎移植技术及体外受精在动物生物多样性上的应用在保护动物遗传资源，提高家畜生产性能，挽救濒临灭