鸡传染性喉气管炎气管粘膜扫描电镜观察.docxVIP

PAGE

1-

鸡传染性喉气管炎气管粘膜扫描电镜观察

一、引言

鸡传染性喉气管炎（Avianinfectiouslaryngotracheitis,AIL）是一种高度传染性的病毒性疾病，主要影响鸡群的健康和生产力。该病由传染性喉气管炎病毒（Avianinfectiouslaryngotracheitisvirus,AIV）引起，该病毒属于冠状病毒科，具有高度变异性，可导致鸡只产生严重的呼吸道症状，如咳嗽、呼吸困难、流泪和喉部肿胀等。据统计，全球每年因鸡传染性喉气管炎造成的经济损失高达数十亿美元。

鸡传染性喉气管炎的传播途径多样，主要包括空气传播、垂直传播和接触传播。感染后，病毒能在鸡体内迅速复制并扩散，导致感染鸡群的发病率高达100%，死亡率可达5%-20%。此外，病毒还可通过种蛋传播，对养鸡业构成严重威胁。为了更好地了解该病毒对鸡气管粘膜的影响，本研究采用扫描电镜技术对鸡传染性喉气管炎气管粘膜进行观察，以期为疾病防控提供科学依据。

近年来，随着分子生物学和生物技术的发展，病毒与宿主相互作用的分子机制研究取得了显著进展。扫描电镜作为一种非破坏性、高分辨率的显微成像技术，能够直观地展示细胞和组织的表面形态和微观结构。本研究通过扫描电镜观察鸡传染性喉气管炎气管粘膜的形态变化，旨在揭示病毒感染后气管粘膜的病理生理过程，为疾病防控提供新的思路。此外，结合病毒感染模型和免疫组化技术，本研究还将进一步探讨病毒感染与宿主免疫反应之间的相互作用。

二、实验材料与方法

(1)实验材料包括健康鸡胚、鸡传染性喉气管炎病毒株、鸡气管粘膜组织样本。健康鸡胚由本实验室提供，鸡传染性喉气管炎病毒株购自中国兽医药品监察所。实验所需试剂包括扫描电镜样品制备试剂盒、戊二醛固定液、磷酸盐缓冲溶液（PBS）、丙酮、戊二醛、乙醇等。

(2)实验方法分为病毒感染、样品制备和扫描电镜观察三个步骤。首先，将鸡胚接种于鸡胚成纤维细胞上，待细胞长满后，用鸡传染性喉气管炎病毒株进行感染。感染后，收集感染细胞并制备气管粘膜组织样本。样品制备过程中，使用戊二醛固定液对气管粘膜组织进行固定，然后进行脱水、临界点干燥和喷金等处理。最后，使用扫描电镜对处理后的样品进行观察。

(3)扫描电镜观察过程中，使用高分辨率扫描电镜对固定后的气管粘膜样品进行扫描，记录样品的表面形态和微观结构。在观察过程中，调整电压和放大倍数，以获得最佳的图像质量。扫描完成后，对获得的图像进行采集和保存，以便后续分析和比较。实验数据采用统计学方法进行分析，包括样本间的差异分析、形态学指标分析等。

三、鸡传染性喉气管炎气管粘膜扫描电镜观察结果

(1)扫描电镜观察结果显示，正常鸡气管粘膜表面光滑，细胞排列整齐，细胞间隙较小，呈现出典型的上皮组织特征。细胞表面覆盖有一层完整的纤毛，纤毛摆动活跃，有助于气道的清洁和气体交换。然而，在鸡传染性喉气管炎病毒感染后，气管粘膜发生了显著变化。病毒感染导致气管粘膜上皮细胞肿胀、脱落，细胞间隙增大，纤毛结构破坏，部分区域出现细胞坏死现象。此外，观察到气管粘膜表面形成大量粘液，粘液层厚度不一，部分区域甚至形成粘液栓，阻碍了气道的正常通气。

(2)在病毒感染早期，气管粘膜上皮细胞出现轻微的形态变化，如细胞肿胀、间隙增大等。随着病毒感染时间的延长，细胞损伤程度加剧，细胞膜破裂，细胞内容物外溢，导致细胞脱落。在扫描电镜下，观察到脱落细胞在气管粘膜表面形成一层薄薄的细胞碎片层，这些碎片层在气管腔内堆积，进一步加重了气道的阻塞。此外，病毒感染还导致气管粘膜下层的血管扩张、充血，血管壁通透性增加，血液渗出，形成血管渗出物。

(3)在病毒感染后期，气管粘膜的病理变化进一步加剧。观察到气管粘膜表面出现大量溃疡，溃疡边缘呈不规则状，底部不平整。此外，气管粘膜下层的结缔组织增生，形成肉芽组织，导致气管壁增厚。在扫描电镜下，观察到肉芽组织中的血管和纤维母细胞增生，血管内皮细胞肿胀，纤维母细胞分泌大量胶原纤维，形成胶原纤维层。这些病理变化严重影响了气管的通气功能，导致鸡只出现呼吸困难等症状。

四、结果分析与讨论

(1)本研究通过扫描电镜观察鸡传染性喉气管炎气管粘膜的形态变化，揭示了病毒感染后气管粘膜的病理生理过程。结果显示，病毒感染导致气管粘膜上皮细胞肿胀、脱落，纤毛结构破坏，粘液分泌增多，形成粘液栓，以及气管壁增厚等病理变化。这些变化与国内外相关研究结果一致。据文献报道，鸡传染性喉气管炎病毒感染后，气管粘膜上皮细胞肿胀率可达80%以上，纤毛脱落率可达60%以上。在本研究中，我们也观察到类似的现象，进一步证实了病毒感染对气管粘膜的严重损害。

(2)病毒感染引起的气管粘膜病理变化对鸡只的呼吸功能产生了严重影响。气管粘膜的肿胀、脱落和粘液栓的形成，导致气管腔狭窄，通气阻力增加，进而影响氧气和二氧化碳的交换