生物检材中乌头碱、新乌头碱和次乌头碱的液相色谱-质谱定性定量检验方法.docx

生物检材中乌头碱、新乌头碱和次乌头碱的液相色谱-质谱定性定量检验方法

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SF/T0171—2024

5.2仪器和设备

仪器和设备及要求如下。

a)液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源(ESD)。

b)电子天平：分度值≤0.1mg。

c)旋涡混合器。

d)离心机。

e)恒温水浴锅。

f)移液器。

6定性分析

6.1样品前处理

6.1.1检材样品

6.1.1.1体液样品

取血液(或尿液)0.5mL,加入硼砂溶液1mL,涡旋混匀，再加入乙醚3mL,涡旋混匀，2500r/min离心3min,取有机层于60℃水浴中挥干，残留物用乙腈：含0.1%甲酸的20mmol/L乙酸铵缓冲溶液(体积比7:3)200L复溶，供液相色谱-串联质谱仪分析。

6.1.1.2组织样品

称取剪碎(或匀浆后)组织0.5g,加入硼砂溶液1mL,浸泡半小时，按6.1.1.1的方法操作。

6.1.2空白样品

移取(或称取)空白血液(或尿液)0.5mL(或相似空自组织0.5g)作为空自样品，按6.1.1.1(或6.1.1.2)的方法，与检材样品平行操作。

6.1.3添加样品

移取(或称取)空白血液(或尿液)0.5mL(或相似空白组织0.5g),添加标准物质工作溶液，配制成1ng/mL(或1ng/g)的添加样品，然后按6.1.1.1(或6.1.1.2)的方法，与检材样品平行操作。

6.2仪器检测

6.2.1仪器条件

6.2.1.1液相色谱条件

以下为参考条件，可根据不同品牌仪器等实际情况进行调整。

a)色谱柱：C18柱(250mm×2.0mm,5μm)或其他等效柱。

b)流动相：流动相A为含0.1%甲酸的20mol/L乙酸铵缓冲溶液，流动相B为乙腈；采用等度洗脱方法，流动相A:流动相B=30:70。

c)流速：0.2mL/min。

d)柱温：室温。

e)进样量：5μ

6.2.1.2质谱条件

6.2.1.2.1以下为参考条件，可根据不同品牌仪器等实际情况进行调整。

a)离子源：电喷雾电离-正离子模式(ESI+)。

b)检测方式：多反应监测(MRM)。

c)离子源电压：5500V。

d)碰撞气、气帘气、雾化气和辅助气均为高纯氮气，使用前调节各气流流量以使质谱灵敏度达到检测要求。

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e)去簇电压和碰撞能量优化至最佳灵敏度。

6.2.1.2.2在符合6.2.1.1和6.2.1.2液相色谱条件和质谱条件下，目标物的质谱参数和保留时间参见表1。

表1目标物的质谱参数和保留时间

目标物

定性离子对D

去族电压Y

碰撞能量cY

保留时间nin

乌头碱

646.4586.1

100

46

3.0

646.4526.2

51

新乌头碱

632.3572.2

100

46

28

632.3354.2

58

次乌头碱

616.4556.2

100

45

3.1

616.4524.0

48

注：带*的离子对为定量离子对

6.2.2进样

分别吸取空白样品提取液、检材样品提取液和添加样品提取液，按6.2.1的条件进样分析。

6.3记录

记录空白样品、检材样品和添加样品中目标物可疑色谱峰的保留时间、质谱特征离子对和离子对丰度比。

6.4定性判断依据

以保留时间、质谱特征离子对峰和离子对丰度比作为定性判断依据。

若检材样品中出现目标物的两对定性离子对的色谱峰，保留时间与添加样品中相应目标物的色谱峰保留时间比较，相对误差在士2.5%内，且定性离子对丰度比与添加样品的离子对丰度比之相对误差不超过表2规定的范围，则可判断检材样品中检出该种目标物。

表2离子对丰度比的最大允许相对误差

离子对丰度比

50%

20%~50%

10%~20%

≤10%

允许的相对误差

±20%

±25%

土30%

±50%

7定量分析

7.1样品前处理

移取(或称取)检材样品中血液(或尿液)0.5mL(或组织0.5g)两份，按6.1.1.1(或6.1.1.2)

的方法操作。

另取与检材样品相似基质的空白样品若干份，添加标准物质工作溶液适量，制得系列质量浓度(或质量分数)或单点质量浓度(或质量分数)的添加样品