花药和花粉培养.ppt

(二)花粉培养方式1、平板培养花粉置琼脂固化培养基上培养。2、液体培养花粉悬浮在液体培养基中培养，需震荡，以利通气。3、双层培养花粉置固体-液体双层培养基上培养。培养基制作方法：先铺一层琼脂固体培养基，凝固后，在表面加入少量液体培养基。4、看护培养利用花药或花药愈伤组织释放出的活性物质促进花粉小孢子发育。用一块活跃生长的愈伤组织来看护单个细胞，并使其生长和增殖。这个愈伤组织块称为看护愈伤组织。第30页，共58页，星期日，2025年，2月5日1）在一个培养瓶中加入一定量厚的固体培养基，灭菌后备用。2）在无菌条件下，将一小块（1cm3）活跃生长的愈伤组织接种到培养基上，再在愈伤组织块上放一片（1cm2）已灭菌的滤纸，放置过夜。3）将分离的花粉接种到已经充分吸收愈伤组织渗透液的滤纸上。4）单细胞分裂形成肉眼可见的小细胞团后，即转移到新鲜培养基上培养，恒温培养，得到单细胞无性系。具体方法2.第31页，共58页，星期日，2025年，2月5日5、微室培养利用小的盖玻片和凹穴载玻片形成微室进行花粉培养。6、条件培养基培养利用培养过花药的液体培养基或含失活花药提取物的培养基上培养。花药条件培养基、子房条件培养等。第32页，共58页，星期日，2025年，2月5日花粉培养过程取花蕾（镜检）预培养数天取花药消毒分离花粉接种培养愈伤组织发生第33页，共58页，星期日，2025年，2月5日三、白化苗现象第34页，共58页，星期日，2025年，2月5日（一）白化苗产生的影响因素及机理1、内因 供体植株基因型（如籼稻比粳稻白苗率高）、花粉发育时期。2、外因 预处理、培养基成分、激素水平与种类、培养条件和方法、愈伤组织转分化时间等。3、机理 核基因起关键作用，导致质体DNA缺失，产生白苗。另外地、无性系变异也可能是原因之一。（二）白化苗的控制

通过对花粉发育时期、预处理、培养基成分等因素进行调控。第35页，共58页，星期日，2025年，2月5日四、影响雄核发育和花粉花药培养的因素（一）基因型植物基因型是影响雄核发育的最重要的因素之一。同一物种中的不同基因型对小孢子离体诱导反应差异较大。如在水稻中，籼稻花粉培养力远低于糯稻。第36页，共58页，星期日，2025年，2月5日小孢子发育时期对诱导雄核发育非常重要。（二）花粉发育时期适宜时期：单核期,尤其是单核中、晚期(单核靠边期)第37页，共58页，星期日，2025年，2月5日芸苔属植物Brassicanapus不同基因型的小孢子产胚率比较Topas 10,000-200,000 1-20Westar 1000-10,0000.1-1Delta 100-10,000 0.01-1Bounty10-1000.001-0.01基因型 胚状体数量/106小孢子成苗率（%）第38页，共58页，星期日，2025年，2月5日1、植株生长条件光温等因素均能影响花药培养力。一般处于适宜生长条件（如温室中）较好。但物种间存在差异。2、植株生长时期一般是开花始期优于开花末期。3、P花粉的频率不同温度、日照时数、氮饥饿及生长物质处理提高P花粉的数量（三）供体植株生长条件和生理状态第39页，共58页，星期日，2025年，2月5日随着细胞体积迅速增大，细胞核由中央位置推向一边，即单核靠边期。。雄配子体的发育营养细胞生殖细胞精子第40页，共58页，星期日，2025年，2月5日四分体:醋酸洋红染色四分体:Alexander’s染色单核期双核期成熟花粉粒处于不同发育时期的烟草小孢子第41页，共58页，星期日，2025年，2月5日第1页，共58页，星期日，2025年，2月5日第一节花粉和花药培养的概念和应用一、花粉和花药培养的概念二、花药和花粉培养