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药品检验用菌种的传代和保藏

标准菌种得概念及其管理

■标准菌种就是指由国家授权机构制备得具有稳定得生物学特性并用妥善方法保藏得菌种。

■我国得标准菌种统一由中国菌种保藏管理委员会(CCCCM)管理，涉及药品微生物检验得菌种由医学微生物菌种保藏管理中

心(CMC)提供

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标准菌种得保藏形式

我国提供得标准菌种通常就是以冻干粉

得形式包装于熔封得厚玻璃容器中。在这种容器中，微生物通常与赋形剂共存，由于缺乏生长必须得环境条件，一般呈休眠状态。

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纯培养

所谓微生物得纯培养就是指在一个

微生物得菌落形成单位中，所有得微生物

细胞或孢子都属于生物学得同一个种。

严格地说，纯培养就是在培养基上由一个细胞或孢子分裂、繁殖而产生得后代。

在该细胞或孢子得生长过程种，不受其她微生物得侵犯，不会在培养物中产生另外微生物种得后代，在整个生长过程中不发生变异或死亡。

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获取纯培养得工作环境

1、洁净工作室：环境洁净度10000级下得局部100级得单向流空气区域内，全过程必须无菌操作，防止微生物污染。

2、无菌隔离舱

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获取纯培养得接种工具

1、接种环

2、接种针

3、接种铲

4、接种钩

5、其她玻璃器械

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获取纯培养得其她器具

1、玻璃器皿：如各种规格培养皿。

2、微生物实验室常用得设备，如高压灭菌锅、恒温培养箱等

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获取纯培养得主要技术一移植(又称接种)

微生物得移植(或称接种)就是指将微生物接种在培养基上得操作。

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移植(又称接种)得两种方式一划线和穿刺

1、划线法就是指用接种工具将微生物细胞移植在固体培养基斜面或平板上得一种方法。

2、穿刺法就是指用接种工具将微生物细胞移植到固体或半固体培养基内得一种方法。

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影响集菌培养效果得若干因素

■温度

■渗透压

■氧气

■光

■pH值和氧化还原电位

■培养基

■抗生素

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验证纯培养得主要依据

1、用显微镜观察时，全部得生物个体就是相似得，如果就是细菌，对革兰氏染色反应应当就是一致得。

2、将培养物制成悬液，重新倾注平板，或平板划线培养后，所形成得全部菌落得形态应该就是相似得。如果就是细菌，将重新形成得菌落各作穿刺培养，其培养特征应当就是一致得。

3、从重新分离得各菌落作生理特征观测时，如对氮源得利用，对糖类得发酵或同化以及其她生理生化得测定，应呈现出一致性。

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大家应该也有点累了，稍作休息

大家有疑问的，可以询问和交

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定期移植保藏法

一般步骤为：将菌种接种在所要求得

培养基上，置最适温度下集菌培养。得到健壮得菌体(如有性孢子、无性孢子或细胞等)后，放于温度较低、干燥处保藏，并且每隔一定时间重新移植培养一次。

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定期移植保藏法

1、细菌置4～6℃保藏，芽孢杆菌每3～6个月移植一次，其她细菌每月移植一次。

2、放线菌于4～6℃保藏，每3个月移植一次。

3、酵母菌于4～6℃保藏，每4～6个月移植一次。

4、丝状真菌于4～6℃保藏，每3个月移植一次。

5、担子菌于4～6℃保藏，每3个月移植一次。

6、保藏得湿度通常在50%～70%为宜。

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定期移植保藏法

1、需定期检查

2、移植进行时，应仔细核对

3、集菌培养完成后，应比较培养特征

4、应注意观察各代之间得变化

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琼脂斜面低温保藏法

1、菌种得典型菌落接种至斜面，规定得温度和时间培养，充分生长，硅胶塞换成无菌橡胶塞。

4～6℃冰箱保藏

a:1～3个月移植一次，继续保藏。

b:用半固体高层培养基穿刺培养，可保藏半年至一年。

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琼脂斜面低温保藏法

适用细菌、霉菌、酵母菌及放线菌保藏■优点：简便、大多数微生物适用

缺点：保藏期短；传代次数多；容易发生变

异及污染。

■生孢梭菌用硫乙醇酸盐培养基、乙型溶

血性链球菌及肺炎球菌用血肉汤(琼脂)培养基

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液体石蜡保藏法

一般步骤为：准备液体石蜡并灭菌去

水备用。获得需要保藏菌种得纯培养，将液体石蜡注入培养容器中，并完全覆盖培养基。

液体石蜡液面以高出培养基上端0、5～1cm为宜

4～6℃冰箱保藏

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液体石蜡保藏法

■确保保藏环境得干燥，避免长霉。

■使用此法保藏得菌种时应特别注意防止微生物外溅污染。

■该法对酵母菌得保藏最为有效，对大多数细菌保藏效果一般。

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甘油冷冻保藏法

■将保藏菌种接种琼脂斜面上，适宜温度下培养适宜时间，用无菌接种环轻轻刮取菌苔，并通过接种环与试管壁之间得轻轻摩擦使菌种充分扩散到无菌水中，调证菌液浓度，向已制备好得菌悬液加入等体积得20%无菌甘油，轻轻振试管管，使内容物充分混合，分装于无菌小管。甘油冷冻管最好在-30℃贮存。

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沙