进出口纺织品生物安全检验方法 第10部分：乙型溶血性链球菌.docx

进出口纺织品生物安全检验方法

第10部分：乙型溶血性链球菌

组分

管试验用量

10XPCR缓冲液(5,10)

2.5pL

nX2.5μL

dNTP混合液(10mmol/L)(5.11)

1.0μL

n×1.0gL

上游引物(10μmol/L(5.12)

1.0pL

n×1,0μL

下游引物(10μmol/L)(5.12)

1.0pL

n×1,0L

探针(10pmol/L)(5,12)

1.0pL

n×1.0L

agDNA聚合酶CSU/pL)(5,13)

0.5pL

n×0.5mL

灭菌双燕水(5.8)

16.0paL

×16.0L

总体积

23.0pL

×23.0L

生：上、下游引物终浓度为04pmol/L探针终浓度为0.4gmol/L

SN/T4656.10-2024

对于阳性结果，见方法一7.3进行确认。

8.5结果报告

根据确认结果报告样品中检出或未检出乙型溶血性链球菌。

9防止污染和废弃物处理的措施

应符合SN/T4656.8的规定。

SN/T4656.10—2024

附录A

(规范性)

培养基和试剂

A.1培养基制备及质量保证

按SN/T1538.1和SN/T1538.2制备培养基并进行性能测试，如使用等效商品化脱水合成培养基，使用前对其进行验收并按其说明书使用。

A.2改良胰蛋白胨大豆肉汤(mTSB)A.2.1胰蛋白胨大豆肉汤(TSB)

A.2.1.1成分

胰蛋白胨

17.08

大豆蛋白胨

3.0g

氯化钠

5.0g

磷酸氢二钾(无水)

2.5g

葡萄糖

2.5g

蒸馏水

1.000.0mL

A.2.1.2制法

将A.2.1.1中各成分融于燕馏水中，加热溶解，调节pH至7.3±0.2,121℃高压灭菌15min。备用。

A.2.2抗生素溶液

A.2.2.1多黏菌素溶液

称取10mg多黏菌素B置于10mL灭菌蒸馏水中，振摇混匀，充分溶解后过滤除菌。

A.2.2.2萘啶酮酸钠溶液

称取10mg茶啶酮酸置于10mL.0.05mol/L.氢氧化钠溶液中，振摇混匀，充分溶解后过滤除菌。

A.2.3完全培养基

A.2.3.1成分

胰蛋白胨大豆肉汤(TSB)

多黏菌素溶液

萘啶酮酸钠溶液

A.2.3.2制法

1000.0mL10.0mL.

10.0mL

无菌条件下，将A.2.3.1中各成分进行混合，充分混匀，分装备用。

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SN/T4656.10-2024

A.3哥伦比亚CNA血琼脂

A.3.1成分

胰酪蛋白胨

动物组织蛋白消化液

醉母提取物牛肉提取物玉米淀粉

氧化钠

琼脂

多黏菌素茶啶酸

蒸馏水

12.0g5.0g3.0g

3.0g

1.0g

5.0g

13.5R

0.01g

0.01g

1000.0mL

A.3.2制法

将A.3.1中各成分溶于蒸馏水中，加热溶解，调节pH至7.3±0.2.121℃高压灭菌15min。待冷

却至50℃左右时加50mL无菌脱纤维绵羊血，摇匀后倾倒于平板上

A.4哥伦比亚血琼脂A.4.1基础培养基

A.4.1.1成分

动物组织酶解物

23.0g

淀粉

1.0

氯化钠

5.0g

琼脂

15.0g

蒸馏水

1000.0mL

A.4.1.2制法

将基础培养基成分溶解于燕馏水中，加热溶解，121℃高压灭菌15min.

A.4.2无菌脱纤维绵羊血

无菌操作条件下，将绵羊血加入盛有灭菌玻璃珠的容器中，振摇10min,静置后除去附有血纤维的玻璃珠即可。

A.4.3完全培养基

A.4.3.1组分

基础培养基

无菌脱纤维绵羊血

1000.0mL50.0mL

A.4.3.2制法

当基础培养基的温度为45℃左右时，无菌加入绵羊血，混匀。调节pH至7.2±0.2。倾注15mL

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SN/T4656.10-2024

于无菌平皿中，静置至培养基凝固。使用前需预先干燥平板。预先制备的平板未干燥时在室温放置不应超过4h,或在4℃冷藏不应超过7d。

A.5胰蛋白胨大豆肉汤(TSB)

A.5.1成分

胰蛋白胨

17.0g

大豆蛋白胨

3.0g

氧化钠

5.0g

磷酸氢二钾(无水)

2.5g

葡萄糖

2.5g

蒸馏水

50.0mL

A.5.2制法

将A.6.1中各成分溶于燕馏水中，加热溶解，