有机高分子基质的HPLC填料.pptVIP

若样品为阳离子，用无机酸作流动相，抑制柱为高容量的强碱性阴离子交换剂。当试样经阳离子交换剂的分离往后，随流动相进入抑制柱，在抑制柱中发生两个重要反应：R+－OH＋H+Cl--→R+－Cl十H2OR+一OH-＋M+Cl--→M+OH－＋R+－Cl-由反应可见：经抑制柱后，一方面将大量酸转变为电导很小的水，消除了流动相本底电导的影响。同时，又将样品阳离子M+转变成相应的碱，由于OH-离子的淌度为Cl-离子的2.6倍，提高了所测阳离子电导的检测灵敏度。对于阴离子样品也有相似的作用机理。(1)离子色谱法（IC）在分离柱后加一个抑制柱的离子色谱亦称为抑制型离子色谱或称双柱离子色谱。由于抑制柱要定期再生，而且谱带在通过抑制柱后会加宽，降低了分离度。01后来，Frits等人提出不采用抑制柱的离子色谱体系，而采用了电导率极低的溶液，例如1×10-4～5×10-4mol·dm-3苯甲酸盐或邻苯二甲酸盐的稀溶液作流动相，称为非抑制型离子色谱或单柱离子色谱。02(1)离子色谱法（IC）IPC是分离分析强极性有机酸和有机碱的极好方法。它是离子对萃取技术与色谱法相结合的产物。离子对色谱法原理离子对色谱法是将一种（或数种）与溶质离子电荷相反的离子（称对离子或反离子）加到流动相或固定相中，使其与溶质离子结合形成离子对，从而控制溶质离子保留行为的一种色谱法。(2)离子对色谱法（IPC）离子对色谱法分离的基本原理A-水相+B+有机相A-B+有机相由于离子对化合物A-B+具有疏水性，因而被非极性固定相（有机相）提取。组分离子的性质不同，它与反离子形成离子对的能力大小不同以及形成的离子对流水性质不同，导致各组分离子在固定相中滞留时间不同，因而出峰先后不同KAB(2)离子对色谱法（IPC）是利用生物大分子和固定相表面存在某种特异性亲和力，通常是在载体（无机或有机填料）表面先键合一种具有一般反应性能的所谓间隔臂（如环氧、联氨等）；随后，再连接上配基（酶、抗原或激素等）。这种固载化的配基将只能和具有亲和力特性吸附的生物大分子相互作用而被保留，没有这种作用的分子不被保留。12(3)亲和色谱法（AC）第二部分：HPLC分离填料有机基质多糖型凝胶高聚物树脂无机基质硅胶氧化锆氧化铝多孔玻璃羟基磷灰石石墨化碳黑基质微球——天然多糖或合成单体或交联剂负载样品的能力强，色谱容量高耐酸碱、具化学稳定性，柱寿命长，易再生不易产生非特异性吸附作用（粒度与粒度分布、孔径与孔径分布、颗粒强度和表观形态→柱效率、穿透性）物理结构→色谱动力学01（连接在基质上的官能团或链段→样品保留值、选择性）化学结构→色谱热力学02一、HPLC色谱柱的关键在于填料HPLC色谱柱填料在物理结构上的要求:颗粒大小合适，粒度分布较窄;颗粒强度适应高速高压操作;多孔型的孔径大小和孔径分布适宜,避免复杂的微孔结构;一定的溶胀及收缩水平。12常见的液相色谱填料类型多孔型非多孔型薄壳型分：小孔（10nm）、中孔（10-30nm）、大孔（30nm）和超大孔（100nm），应用占主导地位整体颗粒无孔颗粒表面层多孔，内部无孔。以合成树脂为基质的产品，颗粒在10μm左右以合成树脂为基质的产品，颗粒7μm以多糖凝胶为基质的产品，颗粒都20μm左右同左颗粒单分散的填料;01贯穿性超大孔结构的填料;02小颗粒的非多孔填料。03目前的主要发展方向(研究热点):HPLC色谱柱填料在化学结构上的要求特定的选择性;良好的化学稳定性及热稳定性;避免不可逆吸附。不同填料的化学结构是通过对基质材料的化学改性而实现的。12离子交换色谱填料颗粒表面携带季铵基、DEAE基、磺酸基、羧基等强弱阴阳离子集团。1反相色谱填料2C18、C8烷基等强疏水性集团3正相色谱填料4羟基、氨基、氰基等极性集团5亲和色谱填料蛋白质、抗体、激素、抗菌素、酶等具有生物特异性的配基6二、有机高分子类型的HPLC填料基质树脂基质材料决定填料物理结构和化学结构:颗粒大小与分布,颗粒强度,孔径大小,孔结构形态,颗粒内部的化学结构及其稳定性,直接影响对颗粒的表面(包括内孔表面)的化学修饰。可分为:多糖型聚合物型（一）多糖型基质材料高交联的羟丙基化葡聚糖,其颗粒刚性好,粒度小而且分布范围窄（10~23μm）;SephasorbHPUitrafine用于中低压色谱和高效色谱烯丙基葡聚糖与N,N`-亚甲基双丙烯酰胺交联共聚而成的凝胶。Sephacryl系列(S-100HR,S-200HR,S-300HR)