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无菌检查法演示实验

抗生素室易大为

辽宁省药品检验所提纲1.定义2.常见检验品种3.4.培养基及培养基的适用性检查5.稀释液以及冲洗液6.无菌检查法实例7.方法学验证试验定义:系指用于检查药典要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。符合规定的意义:仅表明了供试品在该检验条件下未发现被微生物污染。020103注射剂(水针、粉针、油乳注射剂）01眼用以及非注射产品（手术、烧伤、严重创伤面给药制剂）02无菌封装的原料药03医疗器具和医用材料042.常见检验品种硫乙醇酸盐流体培养基30～35℃红色氧化层（h＜深度的1/5），100℃水浴加热除去氧化层，123时间不超过20分钟改良马丁培养基23～28℃43.培养基沸水浴

加热10min灭菌后放置3天的培养基4.培养基的适用性检查无菌性检查每批培养基随机取不少于5支（瓶）,培养14天,应无菌生长。灵敏度检查硫乙醇酸盐流体培养基12ml，9支，4种菌，35℃培养3天；改良马丁培养基9ml，5支，2种菌，25℃培养5天。结果判断:空白管应无菌生长,加菌管均生长良好菌液制备（＜100cfu/ml的菌悬液）硫乙醇酸盐流体培养基灵敏度检查试验生孢梭菌

64901铜绿假单胞菌10104枯草芽孢杆菌63501金黄色葡萄球菌260031%蛋白胨水溶液——稀释液（如果蛋白胨溶液浑浊，应过滤）12十四烷酸异丙酯——膏剂和粘性油剂的溶剂，膜滤除菌3聚山梨酯80-0.1%蛋白胨水溶液——非水溶液制剂供试品的冲洗稀释液以及冲洗液明确检验数量与检验量根据供试品的情况，确定检样数量固体制剂or液体制剂；批出厂or上市抽检；直接接种法or薄膜过滤法参考药典附录90-91页表1，表2，表36.供试品的无菌检查5%聚山梨酯80-0.1%胨水溶液冲洗薄膜加培养基培养14天1%蛋白胨水溶液萃取检验流程：取规定量供试品十四烷酸异丙酯溶解取水相作为供试液薄膜过滤示例：红霉素眼膏——无菌检查上市抽检样品膏剂和粘性油剂供试品规格：2.5g：12.5mg红霉素薄膜过滤法（阳性对照增加1/2最小检验量）依据以上的检品信息，查表3确定最少检验数量以及最少取样量已知信息：本品装量2.5g：300mg≤M＜5g最少检验数量——供试品+阳性对照：+5=15支每支最少取样量：150mg每支实际取样量：1g左右（约为装量的2/5）共计的接入量——15克左右十四烷酸异丙酯的用量约为供试品总接入量的1倍～2倍左右。作用：溶解膏剂中的凡士林，使红霉素分散均匀。十四烷酸异丙酯实际用量25ml萃取液：0.1%蛋白胨水溶液200ml冲洗液：（检细菌、检真菌、阳性对照）5%聚山梨酯80-0.1%胨水溶液2100ml（阴性对照：冲洗液400ml）小结：薄膜过滤法：阳性对照增加1/2最小检验量检验数量：15支，每支取样1克，总接入量15克冲洗液用量：2100ml，（700ml/筒）阳性对照—金黄色葡萄球菌（＜100cfu）供试品阴性对照硫乙醇酸盐流体培养基改良马丁培养基结果判断规定温度，培养14天供试品a.无菌生长，同时阳性管有菌生长符合规定?√b.有菌生长不符合规定Χc.试验结果无效，须复试设备环境原因试验过程染菌阴性管有菌生长无菌操作不当d.阳性管规定时间内无菌生长（2~3天内）须重新进行方法验证薄膜过滤法（选择供试品对其生长有抑制作用的菌株做方法学考察）——考察冲洗量以及其他灭活方法的效果当供试品为新的产品或供试品的组分、检验条件发生改变时，需进行方法学验证直接接种法（6个菌株）——考察供试品是否有抑菌作用7.方法学验证试验取红霉素眼膏一支，无菌操作取出全部内容物，移入含适宜乳化剂的稀释液中，充分混合，作为供试液；量取一定体积供试液（相当于固体取样量150mg）置相应的培养基中；(改良马丁）接入相应的试验菌（黑曲霉or白色念珠菌）同时做阳性对照25℃培养3～5天，逐日观察32145直接接种法（方法学验证试验）红霉素对黑曲霉生长无抑制作用.01红霉素对白色念珠菌生长无