生化基础知识-比色法.ppt

**光的颜色与物质之间到底有什么关系？牛顿打破砂锅问到底，……发现红色高锰酸钾溶液选择性吸收了白光中绿光，自身呈现出红色。**那么，这种自然现象到底有何规律？大量的试验证明……物质的颜色，是由于……**秘密在于选择性吸收了自然光中某一波长的光，而呈现出其互补色，这这两杯溶液呈现不同颜色的原因，就是这个美丽的大自然五光十色的原因。**好了，请回答下面的问题。**1、随着这方面知识的积累，人们希望能用数学模型来解释“物质选择性光吸收”的自然现象。这样可以知道物质到底吸收了多少光？2、解释透光度；3、那么我问一下，剩下的光哪去了？……这部分光就是被物质吸收掉了，那么这个值就是吸光度。它等于透光度的负对数。也就是透光度大，吸光度小；反之，……。吸光度的概念用来量化物质选择性吸收光的能力。**T与A是负对数关系。解释表中关系……。提问。**随后就有人发明了测量物质吸光度的仪器……主要由光源，单色器（因为“物质是选择性吸收光”必须把光分离开来），比色杯，检测器等构成，可以测量出物质溶液的吸光度大小，由于物质溶液吸光度大小也就表示其颜色深浅，故把这种仪器称为比色计。**由于单色器可以分离出不同波长的光，又称为分光光度计。**把不同浓度物质溶液放在连续波长的比色计测量A，以A为纵坐标，以波长为横坐标，得到吸收曲线。我们发现：(1)不同浓度的吸收曲线的形状，吸收峰、谷对应的波长一样，这是由物质本身分子的结构决定，是物质的特性，与浓度无关；(2)吸收峰高度随浓度增大而增大。根据物质溶液的吸收曲线，我们知道其作用(1)定性的依据，λmax；(2)反映溶液对光的选择性吸收，和物质溶液呈色的原因；(3)帮助选择入射光的波长。选择吸收最大，干扰最小的波长为定量分析的入射光。**在研究物质光吸收现象的过程中，我们要知道Lambert和Beer这两个人。1760年由Lambert(兰贝特)提出。此人是个调酒师，在工作中发现，同一种红酒倒在大小不等的酒杯中，其颜色深浅不一。他进一步试验，……，提出物质溶液A与其光径成正比。这种善于把握机会的发现，使Lambert名垂千古。**过了快一百年，Beer在1852年又证实了物质溶液A与C的关系，他做了这个试验……。*关于生化基础知识-比色法第1页，共25页，星期日，2025年，2月5日多么美丽五彩斑斓的春天啊第2页，共25页，星期日，2025年，2月5日为什么上述溶液呈现不同的颜色？第3页，共25页，星期日，2025年，2月5日自然光-赤橙黄绿青蓝紫第4页，共25页，星期日，2025年，2月5日波长决定颜色第5页，共25页，星期日，2025年，2月5日光谱-连续不同波长光的集合第6页，共25页，星期日，2025年，2月5日物质对不同波长光的选择性吸收第7页，共25页，星期日，2025年，2月5日由于物质对不同波长光的选择性吸收而引起，物质呈现的是被吸收颜色的互补色。单色光互补光复色光第8页，共25页，星期日，2025年，2月5日现在知道她的秘密了吗？第9页，共25页，星期日，2025年，2月5日脑筋急转弯1、红光照射红色溶液，看透过什么色？2、红光照射绿色溶液，看透过什么色？第10页，共25页，星期日，2025年，2月5日透光度（透射比）Transmittance透光度定义：T取值为0.0%~100.0%全部吸收T=0.0%全部透过T=100.0%吸光度定义：第11页，共25页，星期日，2025年，2月5日T、A与颜色的关系－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－透光率（T）吸光度（A）－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－10.0000.750.1250.50.3010.250.6020.170.7700.11.0000.05