发育毒性与致畸作用课件.ppt

圍產期毒性試驗流程圖致畸試驗致畸作用是發育毒性中最重要、最容易觀察到一種表現，故化學物發育毒性的評定主要通過致畸試驗。在致畸試驗中除可觀察到出生幼仔畸形外，也可同時發現生長發育遲緩和胚胎致死。Ⅱ段試驗是評定化學物是否具有致畸作用的標準方法。動物選擇:一般要求選用兩種哺乳動物齧齒類：首先考慮大鼠，也可採用小鼠。非齧齒類：多選家兔。致畸試驗劑量分組試驗劑量組最少應設三個劑量組：高、中、低。每組劑量成等比級數關係。另設對照組。原則上高劑量組可引起母體輕度中毒；中劑量組可允許母體出現某些極輕微中毒症狀；最低劑量組不應觀察到任何中毒症狀。致畸試驗動物交配將性成熟雌雄動物按雌雄1：1或2：1比例同籠交配，每日通過陰栓或陰道塗片精子檢查，將已確定受孕雌鼠隨機分入各劑量組和對照組。出現陰栓或精子之日即為受孕第1天。致畸試驗動物染毒染毒時間：在器官形成期，即從著床期到硬齶閉合大、小鼠孕期的第6~15天兔孕期的6~18天。染毒方式與途徑應與人體實際接觸情況一致一般多經口給予。致畸試驗染毒期間觀察妊娠動物的：體征和死亡（1次/日）;體重和體重改變（2次/日）；攝食量（1次/日）；其他毒性研究中已證實的重要靶效應。致畸試驗胎體檢查：自然分娩前1~2天將受孕動物處死：一般大鼠在受孕後第19~20天；小鼠第18~19天；家兔在第29天。致畸試驗剖腹處死時對所有妊娠動物進行屍體解剖和肉眼檢查。保存肉眼發現有改變的臟器，以便進行組織學評價。取出子宮及活產胎體，並另行記錄死胎和吸收胎。活胎取出後，先檢查性別，逐只稱重，並按窩計算平均體重，然後由下列幾方面進行畸形檢查：外觀畸形內臟及軟組織畸形骨骼畸形。畸形檢查只限活產胎體。致畸試驗指出生前後接觸有害因素，子代個體發育為成體之前誘發的有害影響，主要表現為：發育生物體死亡生長改變結構異常功能缺陷4.發育毒性（developmentaltoxicity）發育毒性的主要表現發育生物體死亡：包括受精卵未發育即死亡；胚泡未著床即死亡（早早孕丟失）；著床後發育到某一階段死亡。早期死亡被吸收或自子宮排出（自然流產）；晚期死亡成為死胎。發育毒性的主要表現生長改變（alteredgrowth）:生長遲緩，生長發育指標低於正常對照的均值2個標準差。結構異常（structuralabnormality）:指胎兒形態結構異常，即畸形。功能缺陷（functionaldeficiency）:即胎仔的生化、生理、代謝、免疫、神經活動及行為的缺陷或異常。5.出生缺陷（birthdefect):指嬰兒出生前即已形成的發育障礙，包括畸形和功能缺陷。如先天性心臟病、唇齶裂、神經管畸形、尿道下裂、隱睾症等。6.不良妊娠結局（adversepregnancyoutcomes)：指妊娠後不能產生外觀和功能正常的子代。二、發育毒性的作用特點和影響因素與對其他器官系統的毒性作用相比，外源化學物的發育毒性作用有顯著的特點:致畸作用受到多種因素的影響，包括敏感期、遺傳類型、劑量、母體毒性等。（一）發育各階段發育毒性作用特點和致畸敏感期卵子受精後一直發育直至出生為止，都稱為孕體。從受精到新生兒的發育過程經歷著:著床前期器官形成期最容易引起畸形的階段胎兒期圍生期和出生後的發育期1.著床前期又稱為分化前期，從受精時算起，到完成著床之前。該期限在人類為11-12天；齧齒動物為前6天。這時受損傷的胚泡容易死亡，稱為著床前丟失。有些化學毒物作用於胚泡，使之死亡而丟失。著床前期發育毒性一般認為，此時很少發生特異的致畸效應。也有著床前期接觸毒物導致胎兒畸形的例子。如：甲基亞硝脲子代神經管缺陷小鼠妊娠第2.5天、3.5天和4.5天齶裂孕體著床後直到硬齶閉合的一段時間。是發生結構畸形的關鍵期(criticalperiod)，也稱致畸敏感期。在此期間，大多數器官對致畸作用有特殊敏感期，即所謂的時間“靶窗”（targetwindow）。自受精之日計算：人是3-8周；大、小鼠是6~15天；家兔為6~18天。2.器官形成期同一劑量的一種致畸物在敏感期與胚胎接觸，可因胚胎所處發育階段不同而出現不同的畸形。Case1：大量維生素A在受精後第8天給予大鼠，主要出現骨骼畸形；在第12天給予，則誘發齶裂。case2：同樣劑量砷酸鈉在小鼠受精第7天和第9天分別給予，前者主要出現臍疝，後者主要為露腦。器官形成期發育毒性Rodentdeve