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ADAM28通过调节巨噬细胞极化参与慢性鼻窦炎伴鼻息肉进展的研究

摘要

目的：

慢性鼻窦炎伴鼻息肉（Chronicrhinosinusitiswithnasalpolyps，CRSwNP）是一

种发生于鼻腔鼻窦黏膜的上气道异质性疾病，病程大多持续12周。CRSwNP发病

机制复杂，细菌感染、免疫失调和过敏等多种因素都可能调控CRSwNP的发生发

展。CRSwNP的病理特征常表现为上皮屏障功能破坏、炎症细胞浸润以及组织重

塑。巨噬细胞是机体先天免疫的第一道防线，可维持机体的平衡。根据刺激物的不

同，巨噬细胞主要划分为两种类型：M1型巨噬细胞与M2型巨噬细胞。在脂多糖

（Lipopolysaccharide，LPS）或者干扰素γ（Interferonγ，IFN-γ）的刺激下，巨噬

细胞可被激活为M1型巨噬细胞，发挥促炎作用；M2型巨噬细胞可被IL-13或者

IL-4激活，发挥抗炎的作用。巨噬细胞在CRSwNP中发挥着重要作用，多项研究

都证明巨噬细胞参与CRSwNP的致病过程，但其中的分子调控机制仍有待进一步

研究。ADAM28是解整合素和金属蛋白酶家族成员，广泛参与多种癌症疾病的致

病过程。既往研究表明，ADAM28也可在哮喘等上气道炎症性疾病的发病机制中

占据一席之地。此外，ADAM28还与免疫细胞紧密相关，多项研究表明ADAM28

在巨噬细胞中显著升高，但是ADAM28与人巨噬细胞之间的分子调控机制以及在

CRSwNP发病机制中的作用还未有研究。该研究旨在探索ADAM28与人巨噬细胞

M1型极化的调控关系，并进一步探索ADAM28调控CRSwNP发生发展的机制。

方法：

1.从GEO数据库下载公共数据集GSE136825，然后用R软件进行生物信息学

分析，检测ADAM28在公共数据集中CRSwNP组和健康对照组之间的表达水平。

2.通过实时荧光定量PCR和Westernblot实验在组织样本中对ADAM28的表达水

平进行实验验证。3.使用相关性分析进一步探索ADAM28与CRSwNP上皮间充质

转化标志物E-cadherin和α-SMA以及上皮屏障功能标志物Occludin之间的关系，

并进一步检测ADAM28的表达水平与临床评分Lund-MackayCT评分、Lund-

Kennedy评分和SNOT-22评分的相关关系。4.使用人单核细胞系THP1构建巨噬细

胞M1型极化模型，并探索ADAM28在M1型巨噬细胞中的mRNA和蛋白表达水

平。5.利用慢病毒构建ADAM28稳定敲低的THP1细胞系，探索ADAM28敲低之

后对M1型巨噬细胞标志物CD86、CD11b、iNOS、IL-1β、TNF-α、IL-6和NLRP3

表达水平的影响。6.探索ADAM28敲低后对信号通路NF-κB的调控作用。7.收集

ADAM28稳定敲低的巨噬细胞M1型极化上清液，刺激鼻黏膜上皮细胞系HNEPC

和原代鼻黏膜上皮细胞建立炎症模型，并检测上皮间充质转化标志物E-cadherin、

α-SMA、N-cadherin、Vimentin和fibronectin以及紧密连接蛋白Occludin和Claudin-

4等的表达水平。

结果：

1.生物信息学分析结果表明ADAM28在公共数据集GSE136825的CRSwNP

组中显著升高。经实验验证后发现ADAM28的mRNA和蛋白表达水平在非嗜酸性

粒细胞型慢性鼻窦炎伴鼻息肉中的组织中升高，并且ADAM28与上皮间充质转化

标志物E-cadherin呈负相关，与α-SMA呈正相关，与上皮屏障功能标志物

Occludin呈负相关；与临床评分Lund-MackayCT评分、Lund-Kennedy评分和

SNOT-22评分呈正相关。2.免疫荧光共定位结果表明，ADAM28在非嗜酸性粒细

胞型慢性鼻窦炎伴鼻息肉中巨噬细胞显著表达。3.成功构建巨噬细胞M1型极化模

型后，实时荧光定量PCR和Western