植物组织与细胞培养.ppt

第三章

植物组织与器官培养本章内容第一节植物组织培养第二节植物胚胎培养第三节毛状根培养第四节人工种子第五节植物脱毒第二节植物胚胎培养主要内容：胚培养胚乳培养胚珠和子房培养指对植物的胚、子房、胚珠和胚乳进行离体培养，使其发育成完整植物的技术。包括胚培养(embryoculture)（成熟胚培养、幼胚培养）、胚珠培养(ovuleculture)、子房培养(ovaryculture)、胚乳培养(endospermculture)。1904年Hanning最早成功培养萝卜和辣根的胚。1植物胚胎培养（embryoculture）概念:2胚胎培养的类型植物胚胎结构合子发育成胚珠被发育成种皮受精极核发育成胚乳胚培养：指在无菌条件下将胚从胚珠或种子中分离出来，置于培养基上进行培养的技术。01胚的发育过程包括从合子分裂到幼胚形成直至发育为成熟胚的过程。02一、胚培养球形胚前期心型胚前期鱼雷胚球形胚植物胚胎发生过程：原胚－球形胚－心型胚－鱼雷胚－子叶胚促使发育不良或中途败育的胚发育成熟缩短育种周期打破休眠期促进胚萌发建立高频再生体系可作为转基因受体材料胚培养的意义12胚的发育对营养的要求有2个阶段，即：异养期：这一时期的幼小胚完全依赖胚乳和周围的母体组织提供营养。自养期：这一时期胚能吸收培养基中的无机盐和糖，经过自身的代谢作用合成其生长必需的物质，在营养上已可以完全独立。2.胚培养技术培养类型幼胚培养(immatureembryo)成熟胚培养(matureembryo)子叶形成之前子叶形成之后依据所剥离胚的发育时期不同：成熟胚培养成熟胚珠合点珠心珠被珠柄珠孔胚囊成熟胚培养：指子叶期至发育成熟的胚培养。成熟胚是自养的，培养基需要简单。仅提供一定的温度、湿度就可以发芽生成植物体。如种子的发育。01培养过程：种子——70%酒精消毒——选取完好种子——70%酒精浸数秒——0.1%升汞或10%次氯酸钠浸泡——无菌水冲洗——种子培养几天——剥离种胚——接种在培养基上。02成熟胚培养一般较易获得成功成熟胚培养成熟胚培养01幼胚培养：是指处于原胚期、球形期、心形期、鱼雷期的胚培养；幼胚完全是异养的，离体条件下培养要求培养基成分复杂，培养不易成功。02幼胚培养的基本程序：取子房—常规表面消毒——解剖镜下，取胚珠、去珠被、取出完整幼胚——固体培养幼胚培养培养基：无机盐、碳水化合物、激素等01环境条件(温度：多数为25-30℃，因植物种类有所差别。光照：一般认为黑暗或弱光条件较为合适。)02提高幼胚的成活率，可采用胚乳看护培养03影响幼胚培养成功的因素幼胚培养胚龄与胚性发育的关系胚龄越小，离体培养越困难；胚的发育分为自养期和异养期，双子叶植物球形胚之前属于异养，心形胚以后转入自营养；胚乳培养（Endospermculture）：是指将胚乳组织从母体上分离出来，通过离体培养，使其发育成完整植株的技术。被子植物胚乳是由2个单倍的极核和1个单倍的精子结合而成的3倍体组织。由它可获得无子结实的3倍体植株，进而可将它加倍成6倍体植株。裸子植物很特殊，它的胚乳在受精前就已形成。裸子植物的胚乳为配子体的一部分，由大孢子直接分裂发育而成，因此是单倍体组织。二、胚乳培养1.胚乳离体培养的意义12543胚乳培养再生植株证明了全能性理论；研究胚和胚乳的关系及胚乳组织的功能；再生植株多为三倍体，产生无籽果实；可以从胚乳愈伤中分离和筛选各种类型的非整倍体植株。胚乳细胞是研究淀粉、蛋白质和脂类天然产物代谢途径的理想系统。12345含胚乳的果实或种子→表面消毒→无菌条件下胚乳的剥离→接种培养基培养。1培养室温度25-27℃，黑暗或弱光下进行。2胚乳培养过程2.胚乳培养技术胚乳培养的器官发生愈伤组织形成、器官发生愈伤组织的诱导愈伤组织的再分化胚乳苗的生根培养