酵母菌的形态观察大小测定和直接计数.ppt

**************************关于酵母菌的形态观察大小测定和直接计数第1页，共26页，星期日，2025年，2月5日目的要求：

1、观察酵母菌的形态及出芽生殖，学习区分酵母菌

死活细胞的实验方法。

2、学习并掌握用测微尺测定微生物大小的方法。

3、掌握使用血球计数板进行微生物计数的方法。第2页，共26页，星期日，2025年，2月5日1、基本原理：酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，大多数酵母菌以出芽方式进行无性繁殖，有性繁殖通过接合产生子囊孢子。美蓝是一种无毒性的染料。它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。因此酵母活细胞是无色的，而死细胞或衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，以此进行鉴别。一、.酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别第3页，共26页，星期日，2025年，2月5日美蓝浸片的观察：（1）在载玻片中央加一滴0.05%吕氏碱性美蓝染色液，用滴管取1滴酵母菌菌液于染液中，混合均匀。（2）加盖玻片。注：不要产生气泡。（3）将制片放置约3min后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母菌的形态和出芽情况，并根据颜色区别死、活细胞。2、操作技术第4页，共26页，星期日，2025年，2月5日（4）染色约0.5h后再次进行观察，注意死细胞数量是否增加。（5）绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征，并计算0.5h后酵母菌的死亡率。第5页，共26页，星期日，2025年，2月5日酵母菌第6页，共26页，星期日，2025年，2月5日1、基本原理微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。微生物大小的测定需借助测微尺---目镜测微尺和镜台测微尺。二.微生物大小的测定第7页，共26页，星期日，2025年，2月5日第8页，共26页，星期日，2025年，2月5日第9页，共26页，星期日，2025年，2月5日

镜台测微尺：

是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般将1mm等分为100小格，每格长0.01mm。用于校正目镜测微尺每格的相对长度。

目镜测微尺：

是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，测量时，需要将其放在接目镜中的隔板上，用以测量经显微镜放大后的细胞物象。

第10页，共26页，星期日，2025年，2月5日由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大倍数不同，目镜测微尺每小格代表的实际长度也不一样。因此，用目镜测微尺测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求出该显微镜在一定放大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度，然后根据微生物细胞相当于目镜测微尺的格数，计算出细胞的实际大小。球菌用直径来表示其大小；杆菌则用宽和长的范围来表示。第11页，共26页，星期日，2025年，2月5日（1）装目镜测微尺(换目镜)把目镜上的透镜旋下，将目镜测微尺刻度朝下放在目镜镜筒内的格板上，然后旋上目镜透镜，再将目镜插入镜筒内。（2）校正目镜测微尺：1）放镜台测微尺：将镜台测微尺刻度面朝上放在显微镜载物台上。2.操作技术第12页，共26页，星期日，2025年，2月5日2）校正：先用低倍镜观察，将镜台测微尺有刻度的部分移至视野中央，调节焦距，当清晰地看到镜台测微尺的刻度后，转动目镜使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度平行。利用移动器移动镜台测微尺，使两尺在某一区域内两线完全重合，然后数出两重合线之间镜台测微尺和目镜测微尺所占的格数。用同样的方法换成高倍镜进行校正，测出在高倍镜下，两重合线之间两尺所占的格数。第13页，共26页，星期日，2025年，2月5日3）计算：目镜测微尺每格长度（um）=两重合线间镜台测微尺格数x10/两重合线间目镜测微尺格数（3）菌体大小测定：目镜测微尺校正完毕后，取下镜台测微尺，换上酵母菌染色制片。先在低倍镜下找到标本，换高倍镜测定酵母菌的宽度和长度。测定时，通过转动目镜测微尺和移动载玻片，测出酵母菌的直径或宽和长所占目镜测微尺的格数。最后将所测得的格数乘以目镜测微尺（在高倍镜下）每格所代表的长度，即为该菌的实际大小。（4）测定完毕：取出目镜测微尺后，将接目镜放回镜筒，再将目镜测微尺和镜台测微尺分别用擦镜纸擦试干净，放回盒内保存。第14页，共26页，星期日，2025年，2月5日1、基本原理显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上（又称计菌器），于显微镜下直接计数的一种简便、