初探miR-126b-5p对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响.docx

PAGE8

初探miR-126b-5p对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响

摘要：随着进入现代社会人们的在日常生活中食用品营养质量的不断逐步提高,消费者对新鲜食品猪肉中的营养素和品质必然会具有更高度的健康追求,本试验以3T3-L1前脂肪细胞作为实验对象，用过表达与抑制miR-126b-5p转染细胞并诱导细胞成脂的分化，用qRT-PCR检测相关脂肪生成基因的表达水平。实验结果综合分析表明：miR126b-5p过表达，ACSL1和SCD-1的表达水平极显著上调（P0.001），ACADL和Adipor2和表达水平为极显著下调（P0.001），ATGL和PPARγ的表达水平无显著性变化。而与之相反的结果是，抑制miR-126b-5p使SCD-1和ACSL1表达水平为极显著下调（P0.001），ACADL表达水平为极显著上调（P0.001）；而PPARγ表达水平显著下调（P0.01），Adipor2表达明显显著上调（P0.01），ATGL的表达量无显著性变化。这表明，miR-126b-5p对3T3-L1前脂肪细胞的分化起促进作用。

关键词：3T3-L1前脂肪细胞；SCD-1；Adipor2；ACSL1

前言脂肪是动物机体的重要组成部分，广泛分布于动物的皮肤、血液和肌肉等组织，在保护内脏、维持体温、缓冲外界压力，以及维持细胞膜的正常生物学功能方面发挥着重要作用。饲料中添加适宜脂肪不但为动物提供必需脂肪

酸（EssentialFattyAcid,EFA），作为脂溶性维生素载体促进其吸收，还可以延长食糜在胃肠道中的滞留时间，进而延长营养物质的消化吸收时间，提高营养物质利用率[1]。在猪的饲养过程中，因脂肪添加量过高导致不饱和脂肪酸的增加,会使脂肪变软,影响肉品的致密性,且胴体脂肪与瘦肉以及脂肪层之间易分离,不利于切割,从而降低切割肉的外观吸引力[2]。猪肉的质量方面，猪肉的脂肪含量过高的情况下会使脂肪氧化酸败程度增加,容易类似鱼腥味的异味而使猪肉品质下降，脂肪过多的肉也不宜加工成腌制品如香肠腊肉和火腿等,从而降低加工性能[3]。现有的有研究表明，肌内脂肪含量与肉嫩度成正相关，且它的分布还能降低冷冻肉对肉质嫩度的影响，肌内脂肪还与猪肉的风味、多汁性密切相关，其含量反应在肉质的纹路上面，形成的大理石花纹也是消费者在选购猪肉时最直观的标准之一[4]。

MicroRNA(miRNA)是一类长约22nt，在进化上高度保守的内源性非编码单链RNA分子，目前在多种真核细胞和病毒中均有发现。miRNA的种子序列通过碱基互补配对与靶基因mRNA的3端非编码区（3-untranslatedregion,

3-UTR）区域结合，抑制靶基因合成蛋白质或诱导该mRNA的降解，从而调控基因的表达[5]。近年来，研究人员运用高通量测序技术不断挖掘在动物脂肪组织中发挥作用的miRNA并探究其功能，现已有大量关于miRNA影响动物脂肪沉积的报道[6]。如刘聪[7]等结果如下所示过表达miR-17-5p促进脂肪细胞增殖，促进脂肪分化和血管生成相关基因的表达。李吉隆[8]等研究结果表明miRNA-200c能够促进3T3-L1前体脂肪细胞的分化，促进3T3-L1前体脂肪细胞分化成脂肪细胞。邢钰[9]等结果表明、促分化成熟的3T3-L1脂肪细胞表达miRNA-143。GuoY等[10]报道称，过表达miR-145可以抑制IRS1基因，从而负向调控猪肌内脂肪前体细胞的分化。这些研究表明，miRNA可以调节脂肪细胞的分化，在前脂肪细胞向成熟脂肪细胞分化过程中发挥多种功能。

尽管现已有大量关于miRNA影响动物脂肪沉积的报道，但是，miRNA对3T3-L1前脂肪细胞分化的研究还未发现，这个实验将3T3-L1前脂肪细胞作为实验对象使用，通过过表达miR-126b-5p或抑制其在3T3-L1前脂肪细胞中的表达，检测相关脂肪细胞分化的重要基因的发现水平的变化，发现miR-16b-5p对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响。本试验既可以从表观遗传调控的角度为脂肪沉积相关研究提供新依据，同时也能为猪的育种工作提供新基础理论。

1材料与方法1.1试验材料实验的3T3-L1前脂肪细胞系是从中国医科学研究院基础医学研究所的细胞资源中心购买的。

1.2试验方法

1.2.1诱导成脂分化

诱导分化液的配制:3T3-L1前脂肪细胞的诱导分化在本研究实验主要使用一种经典诱导鸡尾酒法,即分化液A诱导3d，分化液B诱导3d，完全培养液维持3d。分化液A（以50mL离心管为例）：50μL地塞米松，150μL胰岛素，500μLIBMX，500μL双抗，剩下的用DMEM补至50mL；分化液B（以50mL离心管为例）：10