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0102迅速发展阶段(60年代至现在)据罗土韦统计,在60年代初期,全世界还只有十几个国家的少数实验室从事组织培养研究,但到了70年代,组织培养领域仍然空白的国家已经屈指可数。60年代以来组织培养技术所以得到了迅速发展,一方面是由于有了前60年建立的理论和技术基础;另一方面是由于这项技术开始走出了植物学家和植物生理学家的实验室,通过与常规育种、良种繁育和遗传工程技术相结合,在植物改良中发挥了重要的作用,并且在若干方面已经取得了可观的经济效益。60年代以来组织培养技术的发展,概括起来可以分为三个方面:原生质体培养取得重大突破1960年,Cocking等人用真菌纤维素酶分离植物原生质体获得成功,激发了人们对原生质体培养的热情。1971年,Takebe等在烟草上首次由原生质体获得了再生植株,这不但在理论上证明了除体细胞和生殖细胞以外,无壁的原生质体同样具有全能性,而且在实践上可以为外源基因的导入提供理想的受体材料。最近几年间,水稻、玉米、小麦、高粱、谷子和大麦等的原生质体培养才相继告捷。原生质体培养的成功,促进了体细胞融合技术的发展。1972年,Carlson等通过两个烟草物种之间原生质体的融合,获得了第一个体细胞杂种。后来在有性亲合及有性不亲合的亲本之间,又获得了若干其他的体细胞杂种。花药培养取得显著成绩1964年,Guha和Maheshwari报道,在南洋金花中通过离体花药培养由小抱子直接发育成胚。1967年,Bourgin和Nitsch通过花药培养获得了完整的烟草植株。由于单倍体在突变选择和加速杂合体纯合化过程中的重要作用,这一领域的研究在整个70年代得到了迅速发展,获得成功的物种数目增加到160余种,其中包括很多种重要的栽培植物。烟草、水稻和小麦等的花培育种在中国取得了引人注目的成就。第一章植物组织培养概述一、植物组织培养的概念二、植物组织培养的发展历史三、组织培养的应用四、植物组织培养的发展前景一、植物组织培养的概念组织培养的定义植物离体培养(Plantinvitroculture)是指通过无菌操作,把植物体的各类结构材料,即外植体(Explant),接种于人工配制的培养基上,在人工控制的环境条件下,进行离体培养的一套技术与方法,通常称之为植物组织培养(Planttissueculture),或植物的细胞与组织培养。01织培养的原理02织培养是建立在植物细胞全能性学说的理论基础上,所谓全能性,就是说,任何具有完整的细胞核的植物细胞,都拥有形成一个完整植株所必需的全部遗传信息。当然,全能性只是一种可能性,要把这种可能性变为现实性必须满足两个条件:一是要把这些细胞从植物体其余部分的抑制性影响下解脱出来,也就是说必须使这部分细胞处于离体的条件下;二是要给予它们适当的刺激,即给予它们一定的营养物质,并使它们受到一定的激素的作用。一个已分化的细胞要表现它的全能性,必须经历上面所说的两个过程,即首先要经历脱分化过程,然后再经历再分化过程。在大多数情况下,再分化过程是在愈伤组织细胞中发生的,但在有些情况下,再分化可以直接发生在脱分化的细胞当中,其间不需要插入一个愈伤组织阶段,比如烟草的薄层表皮细胞在离体培养中就能不经愈伤组织直接分化出芽来。组织培养的种类根据培养培养基的不同可以将组织培养分为固体培养和液体培养;根据外植体的不同可以将组织培养分为器官培养、胚胎培养和组织培养。根据培养基及其培养方式,可以将植物组织培养区分为:固体培养:也叫琼脂培养。液体培养:液体培养又可分为振荡培养、旋转培养、静止培养等。液体培养基中放入滤纸,再将外值体置于滤纸上进行的培养称为纸桥培养。03040201按植物不同结构材料(外植体),将离体培养技术体系分为:01器官培养及器官原基培养,包括根、茎、叶、花器官及其原基的培养(含根、茎段和花药等);02胚胎培养及以胚胎为基础的培养技术,包括原胚和成熟胚培养,胚乳培养,胚珠或子房培养等;03组织培养,包括分生组织、形成层组织或其他组织结构(含愈伤组织)的培养。044.组织培养的主要内容愈伤组织培养;器官培养;细胞培养;原生质体培养。(1)愈伤组织培养:所谓愈伤组织,原是指植物在受伤之后于伤口表面形成的一团薄壁细胞,在组织培养中,则指在人工培养基上由外植体(由活植物体上切取下来以进行培养的那部分组织或器官)长出来的一团无序生长的薄壁细胞。愈伤组织培养所以是一种最常见的培养形式,是因为除茎尖分生组织培养和一部分器官培养以外,其他几种培养形式最终也都要经历愈伤组织才能产生再生植株,此外,愈伤组织还常常是悬浮培养的细胞和原生质体的来
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