植物细胞悬浮培养.ppt

3．连续培养法(continuousculture)特点:01细胞能在近似恒定状态下生长、营养物质浓度、产物浓度、pH基本保持恒定，细胞浓度以及细胞比生长速率可基本维持不变，细胞维持持续指数增长。01稳定状态可有效地延长分批培养中的对数生长期。013．连续培养法(continuousculture)12543问题:一直有细胞收获，浓度一般不高细胞分裂快、易变异；由于是开放式操作，加上培养周期较长，容易造成污染对设备、仪器的控制技术要求较高。12345悬浮培养（Suspensionculture）悬浮培养是细胞培养的基本方法，是将单个游离细胞或小细胞团在液体培养基中进行培养增殖的技术。特点培养细胞可不断增殖，且生长速度快。液体状态下便于细胞和营养物质的充分接触和交换，细胞状态可以相对保持一致。细胞悬浮培养的建立”悬浮细胞的生长动态愈伤组织的诱导悬浮细胞同步化悬浮系的建立与继代培养选择适宜的外植体：幼胚、下胚轴、子叶。01.选择适宜的培养基：较高激素浓度；必要的附加物质。02.愈伤组织的诱导要求：松散性好、增殖快、再生能力强。其外观一般是色泽呈鲜艳的乳白或淡黄色，呈细小颗粒状，疏松易碎悬浮系的建立与培养callus150~250mlflaskcentrifugeisolationsubculture1g/10mlmedium100~120rmpculturetransfer1time/3d80rpm悬浮培养分散性良好，细胞团较小，一般在30～50个细胞以下。1均一性好，细胞形状和细胞团大小大致相同。悬浮系外观为大小均一的小颗粒，培养基清澈透亮，细胞色泽呈鲜艳的乳白或淡黄色。2细胞生长迅速，悬浮细胞的生长量一般2～3天便可增加一倍。3成功的悬浮细胞培养体系特征悬浮细胞的生长动态01040203根据不同培养时间的细胞数变化，或细胞质量变化。生长速率(p)：不同时间细胞密度(x)的自然对数与起始密度(x0)的自然对数之差与培养时间(t)的比值p＝(lnx-lnx0)/t鲜重：真空减压过滤后称重，反应细胞生长情况干重：鲜细胞烘干至衡重，反应细胞质量悬浮细胞生长的衡量紫锥菊中含有紫锥菊甙、多酚和菊苣酸等活性成分紫錐菊是欧美最受欢迎的草药之一，可治疗伤风感冒、发炎，蛇咬伤、风湿病和咽喉肿痛，在服用后基本无任何副作用。作为免疫增强剂具有抗病毒、抗真菌、抗肿瘤及杀虫、消炎的作用，保健和药植物细胞培养制药强心苷类（侧链为不饱和内酯环）甾醇生物碱：吡啶、喹啉、异喹啉等。醌类：包括蒽醌、萘醌等。蛋白质类：胰岛素、氨基酸、蛋白酶抑制剂。植物病毒抑制剂、植物抗生素等。黄酮类：具有C6-C3-C6结构，生物合成前体是苯丙氨酸和丙二酸单酰辅酶A。多为治理心血管疾病和高血压的药物成分。1小檗碱2蒽醌3黄酮4第一个专利：1956年Routin和Nickell首次数提出利用植物细胞培养技术生产天然产物的第一个专利工业植物生物技术：20世纪90年代明确提出已经从200余种药用植物获得了愈伤组织或细胞悬浮培养物（傅经国等，2004）国际日本：紫草人参红豆杉欧美：美国－红豆杉；德国－紫锥菊国内：罗士韦叶和春郑光植侯嵩生丁家宜植物细胞培养制药进展不受季节、环境、病虫害影响.01不占耕地，适用于贫瘠的地方02代谢产物生产可以在可控条件下进行,可以通过细胞株筛选、特定生物转化途径与代谢调控提高目标产物含量.03利用途径生产次生代谢产物的优点→愈伤组织诱导→→液体培养→→培养条件的优化→→反应器扩大培养ACB→愈伤组织诱导→→固体、液体培养→→高产细胞系筛选→→生物合成途径的研究→器官分化（发状根）→→固体液体培养条件的优化→→反应器扩大培养→→有效成分提取、分离目标植物选择技术路线植物细胞培养logo是在离体条件下，将分离的植物细胞通过继代培养增殖，获得大量细胞群体的一种技术。是人工种子、原生质体培养、花药培养等的支撑技术。01大小;02细胞团的形式存在;03纤维素细胞壁和大液泡,易被剪切力损伤;04生长缓慢05培养基成分丰富而复杂,易被微生物污染;06需光、氧、二氧化碳植物细胞培养的特点:按培养对象来说，可分为原生质体培养和单细胞培养；按培养基类型可分为固体培养和液体培养；按培养方式可分为悬浮细胞培养和固定化细胞培养。培养类型植物单细胞分离和初步培养单细胞获得：机械法；酶解法；愈伤组织法单细胞培养：平板培养(platingculture)看护培