《烟草品种抗辣椒脉斑驳病毒鉴定技术规程》技术报告.docx

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《烟草品种抗辣椒脉斑驳病毒鉴定技术规程》标准项目技术报告

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目录

1项目的背景和意义 3

1.1烟草ChiVMV的重要性 3

1.2烟草抗ChiVMV鉴定技术规程的必要性 3

1.3目的和意义 3

2项目主要内容 1

2.1关键技术内容 1

2.2标准起草制定 1

3项目技术路线 3

4建立ChiVMV分离纯化与检测方法 4

4.1材料与方法 4

4.2结果与分析 4

5制定烟草ChiVMV病害严重度分级标准 6

6开展烟草品种对ChiVMV的抗病性鉴定试验 8

6.1材料与方法 8

6.2结果与分析 10

7标准的重复性验证 15

7.1材料与方法 15

7.2结果与分析 15

8讨论与结论 16

8.1讨论 16

8.2结论 17

参考文献 17

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1项目的背景和意义

1.1烟草ChiVMV的重要性

辣椒脉斑驳病毒（chilliveinalmottlevirus，ChiVMV）为马铃薯Y病毒科（Potyviridae）

马铃薯Y病毒属（Potyvirus）成员，具有马铃薯Y病毒属成员基因组结构的典型特征，主要依靠蚜虫以非持久方式传播，也可以通过病株汁液和机械接触等方式传播，但不能通过种子传播，其自然寄主主要是辣椒、烟草、番茄等茄科作物。

烟草受到ChiVMV侵染后，主要表现为叶片上首先出现褪绿黄化的圆形亮斑，随后病斑

连片，整片叶表现褪绿黄化的斑驳花叶、疱斑、皱缩畸形，严重时圆形亮斑连片变褐、叶脉变褐坏死。ChiVMV不仅在辣椒和烟草间相互传播，且带毒中间寄主和传毒蚜虫数量多、分布广，导致病害蔓延较快、防控较难，是需引起重视的烟草病毒。

1.2烟草抗ChiVMV鉴定技术规程的必要性

筛选抗病资源和培育抗病品种是防控病毒病最有效的措施。国内尚无抗ChiVMV烤烟品

种的报道。目前烟草品种抗病毒病鉴定是依照GB/T23224-2008《烟草品种抗病性鉴定》中的TMV和CMV部分，尚无对ChiVMV的抗病性鉴定方法，亟需制定针对靶标株系的鉴定标准，筛选和储备抗病资源。

国家烟草专卖局于2024年3月下达了《国家烟草专卖局关于印发2024年度烟草行业标

准项目计划的通知》（国烟科[2024]37号），其中《烟草品种抗辣椒脉斑驳病毒鉴定技术规程》作为行业标准制定计划下达，项目类别：YC/T，序号为2。

1.3目的和意义

种植抗病品种是保障烟叶生产的基础，烟草品种对病毒病的抗性评价是抗病育种中的重要环节。本标准制定准确、易行的烟草抗ChiVMV苗期鉴定技术规程，适用于可汁液摩擦传播的ChiVMV的苗期接种鉴定，即是发掘抗性基因和选育抗病品种的保障，又是各个鉴定单位其试验结果横纵可比较的基础。

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2项目主要内容

2.1关键技术内容

通过文献查阅、法规调研，结合国内外烟草品种对病毒病的抗性，依托“全国烤烟品种试验”TMV、CMV和PVY的年度抗病性鉴定试验，并依据实验室对ChiVMV的研究基础，确定主要研究内容如下：

（1）建立ChiVMV分离纯化保存与检测方法。

根据已报道的ChiVMV四川泸州烟草分离物（MK405594.1）的外壳蛋白序列，设计扩增病毒外壳蛋白CP基因的引物。于云南保山、四川凉山、贵州福泉等烟田内，采集具有褪绿黄化圆形亮斑和疱斑皱缩的典型病叶。提取总RNA、反转录、PCR扩增、凝胶回收、克隆及测序。将序列提交NCBI进行BLAST同源比对。

将病汁液摩擦接种在N基因烟草三生NN或CV91上，经过单斑分离纯化后，将单斑汁液接种于繁殖寄主本氏烟或K326、NC89、云烟87等普通感病烟草上，待系统侵染的新叶出现黄化斑驳和皱缩时，取显症叶片采用RT-PCR检测确认后，制备接种物或-80℃保存备用。

（2）制定烟草ChiVMV病害严重度分级标准。

依据烟草感染ChiVMV的发病过程和病害典型症状，参考GB/T23222—2008《烟草病虫害分级调查方法》中规定的TMV、CMV病害分级，制定ChiVMV病害严重度分级标准；并根据田间自然感病和室内接种发病的病程和显症规律，筛选适宜的调查时间。

（3）明确对照品种、接种苗龄、接种物浓度、调查时间和抗性评价等关键技术指标。

项目组参照GB/T23224—2008《烟草品种抗病性鉴定》，并依托“全国烤烟品种