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江苏省地方标准《猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞免疫检测
技术规范(MHC-肽四聚体)》编制说明
一、项目背景
猪繁殖与呼吸综合征(porcinereproductiveandrespiratorysyndrome,PRRS)
是影响猪繁殖和呼吸障碍的免疫抑制性疾病,是当前危害养猪业最重要的基础性
传染病。有研究表明,PRRSV感染后能够诱发机体产生体液和细胞免疫应答,
其中细胞兔疫在机体清除PRRSV感染方面起着更为重要的作用。细胞毒性T淋
CTLs
巴细胞()是机体有效控制各种病毒感染的重要免疫细胞之一。受主要组
织相容性复合体(Majorhistocompatilitycomplex,MHC)I类分子限制性抗原的
特异性CTL反应是机体受到病毒感染时,控制病毒复制和扩散、清除病毒的主
要机制。细胞免疫是评估PRRSV疫苗免疫效力、猪群驯化效果的重要指标,对
PRRSV感染的早期诊断也具有重要的意义。当前尚缺乏客观量化的PRRS细胞
免疫评价技术以及操作规程标准。
MHC-肽四聚体技术(简称pMHC-Tetramer)是检测病原体或肿瘤等特异性T
细胞的一种具有重要应用价值的技术。四个MHC-肽复合物(pMHC)通过生物
素蛋白连接酶(Biotin-proteinligaseA,BirA)-链酶亲和素(Streptavidin,SA)系
pMHC-TetramerMHC-TTcellreceptor,
统组装成,显著增强肽复合物与细胞受体(
TCR)的结合力,借助流式细胞技术检测,具有高灵敏性和高特异性(图1)。
本文件中以猪群优势等位基因型和病毒保守抗原表位肽建立检测PRRSV特异性
T细胞的技术,用于评价细胞免疫功能,适用于PRRSV疫苗免疫效力评价、猪群
驯化效果评估和病毒感染的早期诊断。2024年8月,江苏立华牧业股份有限公司
牵头,联合江苏省农业科学院和立华南京农业产业研究院有限公司完成《猪繁殖
MHC-
与呼吸综合征病毒细胞免疫检测技术规范(肽四聚体)》标准草案,同时
向省质监局提交江苏省地方标准项目申请。
1
图1:MHC肽四聚体组份示意图
引自/
二、项目来源
2024年8月,江苏省质量技术监督局下达立项文件《省市场监管局关于下
20242024143
达年度江苏省地方标准制修订计划的通知》(苏市监标〔〕号),
将《猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞免疫检测技术规范(MHC-肽四聚体)》列入
2024年度省地方标准项目计划,由江苏立华牧业股份有限公司、江苏省农业科
学院和立华南京农业产业研究院有限公司负责起草。
三、实施目的
制定江苏省地方标准《猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞免疫检测技术规范
MHC-PRRSVTPRRSV
(肽四聚体)》,提供特异性细胞的检测技术以评价诱
导的细胞免疫反应,为PRRSV疫苗免疫效力评价、猪群驯化效果评估和病毒感
染的早期诊断提供标准化的操作流程。
四、主要编制过程及主要技术内容确定依据
(一)编制过程
标准制定计划下达后,召开了标准起草组工作会议,组成了标准起草组,分
工开展文献查询、标准编制、意见征求、标准验证等各项标准制定工作。在完成
标准的各项调研、全部试验研究和验证工作后起草完成了征求意见稿。
(二)主要技术内容确定依据
猪繁殖与呼吸综合征是当前危害养猪业最重要的基础性传染病,造成巨大的
经济损失。PRRSV能够显著抑制猪的免疫防御系统,感染肺泡巨噬细胞(PAM)
和其他单核细胞,通过促降解的方式下调MHC分子的表达
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