植物细胞工程课件第一章实验室基本技术.pptVIP

合成洗涤剂铬酸洗涤液洗涤剂用的铬酸洗涤液配方成分强酸溶液中酸溶液弱酸溶液重铬酸钾(g)63120100硫酸(ml)1000200100蒸馏水(ml)2002001000注意事项在蒸馏水中缓慢加入浓硫酸，加热的同时分次加入磨碎的重铬酸钾至其完全融解。重铬酸钾加蒸馏水后加热溶化，冷却后再缓慢加入浓硫酸。塑料用品洗涤一般用合成洗涤剂洗涤，因其附着力较强，因此冲洗时必须反复多次，最后用蒸馏水冲洗。金属用品洗涤金属用品一般不宜用各种洗涤液洗涤，需要清洗时，一般用酒精擦洗，然后火焰干燥。玻璃器皿洗涤新的玻璃器皿、已使用过的试管、烧杯、三角瓶、吸管、滴管等内径狭小的玻璃制品。STEP4STEP3STEP2STEP1培养基湿热灭菌，即高压高温蒸汽灭菌。玻璃器皿湿热灭菌或干热灭菌，即在烘箱中加热至150℃40min，或120℃2h。金属器皿干热灭菌。接种室接种室常采用定期熏蒸，熏蒸剂常用甲醛加高锰酸钾，一般每100ml甲醛加5g高锰酸钾。培养基体积（ml）灭菌温度（℃）灭菌时间（min.）20－501212050－50012125500－50001253501植物细胞培养基及其配制02动物细胞培养基及其配制1.3培养基及其配制植物细胞培养基及配制培养基基本成分培养基配方培养基配制大量元素培养基的大量元素使用量一般在每升几十至几千毫克。大量元素包括C、H、O、N、P,K、Ca、Mg、S。微量元素微量元素的用量一般低于10-5～10-7克分子浓度。植物所需的微量元素有Fe、Cu、Zn、B、Mo、Mn、Co。无机盐类有机成分糖维生素肌醇氨基酸其它生长素细胞分裂素其它植物激素附加复合成分活性炭琼脂010203其它附加成分常用培养基配方：N6(朱至青，1974)B5(Gamboretal,1968)MS（MurashingandSkoog,1962）White（White,1934）常用培养基配方培养基配制大量元素配制成10-20×的母液微量元素配制成100-200×的母液激素单独配制成mg/ml的母液培养用培养基按需要按比例加入动物细胞培养的营养需求特点培养基配方及培养基选择培养基配制动物细胞培养基及配制动物细胞培养液的成分及性质氨基酸类必需氨基酸Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Thr、Cys、Ser等非必需氨基酸维生素类盐类葡萄糖缓冲系统大多数平衡液采用磷酸盐缓冲系统。HEPEs现被广泛使用，常用浓度为25mmol/L。矿物类有机补充物如核苷类、TCA中间产物、丙酮酸盐、类脂化合物等。激素类如insulin、生长激素、氢化可的松等。生长因子类如血小板衍生出来的生长因子（PDGF）、成纤维细胞生长因子（FGF）、表皮生长因子（EGF）、内皮生长因子及增殖刺激活性因子（MsA）等。DCBA平衡液溶液（BSS）天然培养液合成培养液无血清培养基E其他常用液培养基配方及培养基选择表1几种常用的BSS（g/L）RingerPBSTyrodeEarleHanksDulbeccoD-hanksNaCl9.008.008.006.808.008.008.00KCl0.420.200.200.400.400.200.40CaCl20.250.200.200.140.10MgCl2.6H2O0.100.10MgSO4.7H2O0.200.20Na2HPO4.H2O1.560.060.06NaH2PO4.2H2O0.050.141.42KH2PO40.200.060.200.06NaHCO31.002.200.350.35葡萄糖1.001.001.00酚红0.020.020.02血浆01血清02胚胎浸出液03鼠尾胶原04天然培养液人工方法模拟合成如TC199、MEM、RPM-1640、DMEM、Ham’sF12等。0102主要成分是氨基酸、vitamin、碳水化合物、无机盐和其他一些辅助物质等。合成培养液包括基础培养基和附加成分。基础