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免疫荧光技术
间接免疫荧光法测ANA
兰州大学基础医学院免疫研究所梁亚玲
实验原理
以小鼠肝细胞或某些培养细胞（如人喉癌上皮细胞HEP-2）作为抗原片，将病人血清加到抗原片上。
如果血清中含有ANA，就会与细胞核成分特异性结合。
加入荧光素标记的抗人IgG抗体，又可与ANA结合，在荧光显微镜下可见细胞核部位呈现荧光。
试剂与器材
抗原片（自行制备）、异硫氰酸荧光素标记的抗人IgG抗体（购买）、0.01MPBS、待测血清、阳性与阴性对照血清。
器材：荧光显微镜、孵箱、有盖湿盒（内铺浸湿海绵或纱布）、吸管、试管等。
实验步骤
1.制备小鼠肝印片（方法见实验指导），每张玻片轻印两处，分别用记号笔标记。
2.待测血清和对照血清用PBS作1：10稀释，滴加于抗原片上，放湿盒内，37℃温浴30min。
3.取出抗原片，用流水冲去未结合的血清，置PBS（1、2、3缸）中浸洗，每缸5min，吹干。
4.滴加稀释的FITC-抗人IgG抗体，置湿盒内，37℃孵育30min。幻灯片7
5.同步骤3浸洗，吹干。
6.滴加缓冲甘油封片，荧光显微镜检查。
结果观察
细胞核发黄绿色荧光为阳性染色细胞（本实验中为ANA阳性），不发荧光为阴性。
注意细胞核着染荧光的图像类型：均质型、周边型、斑点型、核仁型及混合型。
实验讨论
注意事项：抗原片应用前需吹干；待检血清应保证新鲜。
方法评价：间接免疫荧光技术是检测ANA最常用的方法。
由于鼠肝印片细胞分布布均匀，多有重叠，冲洗时易丢失。目前临床检测采用核大、有丝分裂旺盛、核内细胞器较明显的HEP-2细胞作为基质片。
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