《猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞免疫检测技术规范（MHC-肽四聚体）（征求意见稿）》编制说明.docx

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江苏省地方标准《猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞免疫检测技术规范（MHC-肽四聚体）》编制说明

一、项目背景

猪繁殖与呼吸综合征（porcinereproductiveandrespiratorysyndrome，PRRS）是影响猪繁殖和呼吸障碍的免疫抑制性疾病，是当前危害养猪业最重要的基础性传染病。有研究表明，PRRSV感染后能够诱发机体产生体液和细胞免疫应答，

其中细胞兔疫在机体清除PRRSV感染方面起着更为重要的作用。细胞毒性T淋巴细胞（CTLs）是机体有效控制各种病毒感染的重要免疫细胞之一。受主要组织相容性复合体（Majorhistocompatilitycomplex,MHC）I类分子限制性抗原的特异性CTL反应是机体受到病毒感染时，控制病毒复制和扩散、清除病毒的主要机制。细胞免疫是评估PRRSV疫苗免疫效力、猪群驯化效果的重要指标，对PRRSV感染的早期诊断也具有重要的意义。当前尚缺乏客观量化的PRRS细胞免疫评价技术以及操作规程标准。

MHC-肽四聚体技术（简称pMHC-Tetramer）是检测病原体或肿瘤等特异性T细胞的一种具有重要应用价值的技术。四个MHC-肽复合物（pMHC）通过生物素蛋白连接酶（Biotin-proteinligaseA,BirA）-链酶亲和素（Streptavidin,SA）系统组装成pMHC-Tetramer，显著增强MHC-肽复合物与T细胞受体（Tcellreceptor,TCR）的结合力，借助流式细胞技术检测，具有高灵敏性和高特异性（图1）。本文件中以猪群优势等位基因型和病毒保守抗原表位肽建立检测PRRSV特异性T细胞的技术，用于评价细胞免疫功能，适用于PRRSV疫苗免疫效力评价、猪群驯化效果评估和病毒感染的早期诊断。2024年8月，江苏立华牧业股份有限公司牵头，联合江苏省农业科学院和立华南京农业产业研究院有限公司完成《猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞免疫检测技术规范（MHC-肽四聚体）》标准草案，同时向省质监局提交江苏省地方标准项目申请。

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图1：MHC肽四聚体组份示意图

引自/

二、项目来源

2024年8月，江苏省质量技术监督局下达立项文件《省市场监管局关于下达2024年度江苏省地方标准制修订计划的通知》（苏市监标〔2024〕143号），将《猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞免疫检测技术规范（MHC-肽四聚体）》列入2024年度省地方标准项目计划，由江苏立华牧业股份有限公司、江苏省农业科学院和立华南京农业产业研究院有限公司负责起草。

三、实施目的

制定江苏省地方标准《猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞免疫检测技术规范

（MHC-肽四聚体）》，提供PRRSV特异性T细胞的检测技术以评价PRRSV诱导的细胞免疫反应，为PRRSV疫苗免疫效力评价、猪群驯化效果评估和病毒感染的早期诊断提供标准化的操作流程。

四、主要编制过程及主要技术内容确定依据

（一）编制过程

标准制定计划下达后，召开了标准起草组工作会议，组成了标准起草组，分工开展文献查询、标准编制、意见征求、标准验证等各项标准制定工作。在完成标准的各项调研、全部试验研究和验证工作后起草完成了征求意见稿。

（二）主要技术内容确定依据

猪繁殖与呼吸综合征是当前危害养猪业最重要的基础性传染病，造成巨大的经济损失。PRRSV能够显著抑制猪的免疫防御系统，感染肺泡巨噬细胞（PAM）和其他单核细胞，通过促降解的方式下调MHC分子的表达，降低PAM的抗原递呈能力。目前对PRRSV疫苗的评估主要基于其诱导的抗体反应，尽管免疫后可以产生一定滴度的抗体，但保护效果不理想，因为针对PRRSV的关键中和抗体（NAbs）出现较晚，一般在感染后28天，并且通常水平较低。此外，NAbs通常对同源PRRSV株具有特异性，对异源株的交叉保护作用很小。关于CTL

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介导的免疫，在PRRSV中观察到了特异性的CTL反应。与对照组相比，强毒1型PRRSV导致IL-1α产生增加，CD8+T细胞和产生IFN-γ的细胞比例更高。针对不同PRRSV的交叉反应性也在不同程度上与细胞毒性CD8+IFN-γ和CD8-

IFN-γ+细胞相关。PRRSV特异性T细胞在感染后2周即可观察到，持续感染时病毒载量降低。致弱活疫苗可以诱导CTL免疫反应，并且比灭活的PRRS疫苗对异源PRRSV株提供更好的保护。这些发现表明，特异性CD8+CTL免疫可能在控制PRRSV感染中发挥重要作用。然而，CTL消除PRRSV感染的明确和直接证