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染色质免疫沉淀

什么是染色质免疫沉淀

染色质免疫沉淀

真核细胞内，DNA与组蛋白和其他蛋白质结合形成染色质利用抗体特异性结合目标蛋白，将包含目标蛋白的染色质片

，这种结构是遗传信息的载体。段沉淀下来。

染色质免疫沉淀的原理

交叉连接

1

使用甲醛将DNA与蛋白质交叉连接

染色质剪切

2

将染色质剪切成小片段

免疫沉淀

3

使用抗体将特定蛋白质结合的DNA片段沉淀下来

DNA纯化

4

去除蛋白质和抗体，获得纯化的DNA片段

实验步骤

DNA纯化

1去除蛋白和杂质

免疫沉淀

2

抗体与目标蛋白结合

染色质剪切

3

将染色质剪切成特定大小片段

样品制备

4

收集细胞或组织样本

样品制备

1细胞收集

使用适当的方法收集细胞，例如离心或刮取。

2细胞裂解

用裂解缓冲液破坏细胞膜，释放出细胞核。

3染色质分离

从裂解液中分离出染色质，并去除其他细胞成分。

细胞培养

细胞准备

选择合适的细胞系，例如人或动物细胞系，确保细胞健康且无污染。

培养基制备

配制适宜的培养基，添加必要的营养物质和生长因子，以满足细胞生长需求。

细胞接种

将准备好的细胞悬液接种到培养皿或培养瓶中，确保细胞密度合适。

细胞培养

将细胞置于适宜的温度、湿度和气体环境下，并定期更换培养基，保证细胞的

持续生长。

染色质剪切

目的

将染色质剪切成适当的长度，以便进行免疫沉淀。

方法

常用的方法包括超声波破碎和酶切法。

控制

确保染色质剪切均匀，剪切后的片段长度适宜。

免疫沉淀

抗体结合

1特异性抗体与目标蛋白结合

洗涤

2

去除非特异性结合的物质

洗脱

3