荧光染料选择和数据分析.pptx

荧光染料选择和数据分析图

《

什么就是流式细胞仪

在流动得状态中检测颗粒

性物质各种物理及生物特征得一种仪器；

Fluorescence

signals

Focusedlaser

beam

Injector

Tip

Sheath

thuid

?…

BD

《

信号

射光信号

·前向散射光信号(FSC)·侧向散射光信号(SSC)

●荧光信号

流式细胞仪原理

多

流式细胞仪原理

光信号

顺粒通过聚集得激光束时，激光向各个方

向散射。与激光束方向同轴得称前向角散射光信号(FSC)。与激光束垂直得称为侧向角散色光信号(SSC)。

二

sidescatter

forwardscatter

lightsource

流式细胞仪原理

角散射光信号(FSC)

C反映细胞大小，一般来说，细胞越大，前向角散射光信号越强；

·FSC信号与细胞得折射率有关；

·可用于表示细胞得凋亡；

胞时，可用于设门；

流式细胞仪原理

角散射光信号(SSC)

C信号主要反映了细胞得内部结构，内部结构越复杂，SSC信号越强；

然

笑

流式细胞仪原理

和SSC信号用于检测并显示细胞得物于的持征

SideScatter

中性粒细胞

单核细胞

淋巴细胞

ForwardScatter

2004008001000

009

流式细胞仪原理

信号

荧光抗体或其她染料染色得颗粒通过激光束时，染料吸收光子跃迁到激发态，返回基态时，染料释放出能量，大部分以光得形式释放。这种发射出得光称为荧光。

《

流式细胞仪原理

侧向散射光及荧光(SS)(FL1—FL4)

G

Laser

Beam

Flow

Cell

前向散射光(FS)

大家有疑问的，可以询问和交流

可以互相讨论下，但要小声点

俊

(

DotPlot

P

computer

GREEN

GREEN

RED

流式细胞仪原理

副院

o

名

品

LASER

0SS

流式细胞仪特点及检测标本

强，灵敏度高，速度快，并能实现多参数分

析；

●可检测得样本种类多样

·(1)外周血，骨髓，细针穿刺，洗脱液，实体组织，培养细

胞

·(2)New!血清、血浆、培养上清、细胞裂解液

荧光染料选择得必要性

多色流式细胞仪得开发促进了新得荧光染料得发现及抗体标记物得发展

·但抗体组合选择非常复杂，如果随意选择荧光素搭配得抗体，不可能得到合适得结果。

·在荧光染料得选择上多一点考虑，就可避免重复实验和错误得结果。

惊

流式细胞仪原理

荧光信号

激发波长荧光素发射波长

基本要求-了解您得仪器

试剂得选择从了解您得仪器得配置开始

·激光(激发光源):就是否可以激发待选得荧光素

●检测器：就是否有足够得检测器来检测所要用得荧光抗体组合

●光路设计：影响特别染料得检测效率

滤片：宽滤片提高检测能力，但也会检测到更

多干扰光

荧光染料

488nm激光激发得染料

Fluorescein

Phycoerythrin

PE-TRX

PE-Cy5

PerCP

PerCP-Cy5.5

PE-Cy7

400

500600700

Wavelength(nm)

785/50

800

675/20

712/20

610/20

682/33

575/26

荧光染料

633nm激光激发得染料

595nmand633nmEXCITEDDYES

TexasRed

Allophycocyanin

(APC)

Cy7-APC

400

750LP

500600700800

Wavelength(nm)

660/20

630/22

MarinaBlue

Alexa350

CascadeBlue

PacificBlue

CascadeYellow

400

荧光染料

UV激光激发得染料

535/40

5W00avelath()800

nm

700

en

600

460/40

440/40

460/40

460/40

荧光染料

常见荧光染料得发射波长

100%

Cascade

BlueFITCAlexa

400500