2.2.2动物细胞融合技术与单克隆抗体 课件高二下学期生物人教版选择性必修3.pptx

2.2.2动物细胞融合技术与单克隆抗体“生物导弹”追踪癌细胞抗体

植物体细胞杂交植物细胞融合植物组织培养温故而知新植物体细胞杂交技术实验：人——鼠细胞荧光标记融合实验融合细胞细胞融合37℃40min正在融合的细胞红色荧光染料标记膜蛋白绿色荧光染料标记膜蛋白人细胞小鼠细胞

1、概念：指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。融合后形成的杂交细胞具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞。3、诱导方式：物理法：离心法、电融合法化学法：聚乙二醇（PEG)融合法生物法：灭活病毒诱导法（动物细胞融合特有的诱导方法）一、动物细胞融合技术（不能，动物细胞的全能性受限）注意：诱导融合之前，用胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细胞分散。思考：通过动物细胞融合技术能否形成完整个体？2、原理：细胞膜的流动性

灭活是指用物理或化学手段使病毒失去感染能力，但是并不破坏病毒的抗原结构。病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。一、动物细胞融合技术灭活病毒诱导法（P48相关信息）不灭活的病毒的不可以用作细胞融合诱导剂，会感染动物细胞。融合完成的标志病毒颗粒用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程：

正在融合的淋巴细胞与骨髓瘤细胞5．意义：细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。6．应用(1)成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段。(2)用于制造单克隆抗体。生产单克隆抗体一、动物细胞融合技术

一、动物细胞融合技术比较植物体细胞杂交动物细胞融合原理??步骤酶解法去掉后，诱导融合，形成，再经植物组织培养形成。分散成后诱导细胞融合，形成。方法聚乙二醇（PEG）融合法、高Ca2＋—高pH融合法、电融合法、离心法PEG融合法、电融合法、诱导法用途获得完整的杂种植株主要用于制造单克隆抗体意义打破生殖隔离，实现远缘杂交育种突破有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能细胞膜的流动性细胞的全能性细胞膜的流动性细胞壁原生质体杂种细胞杂种植株单个细胞杂交细胞灭活病毒植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较

二、单克隆抗体及其应用什么细胞能产生抗体？能产生抗体的细胞能否大量无限增殖？什么细胞具有无限增殖的能力？要制备单克隆抗体，就需要找到一种能分泌抗体且增殖能力强的细胞。有没有方法让两种动物细胞进行杂交，培育出既能产生抗体，又能大量增殖的细胞呢？

二、单克隆抗体及其应用1、概念：在抗原物质的刺激下，由浆细胞产生的，可与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。抗体抗原免疫传统抗血清2、传统抗体制备方法及缺陷动物体内多种抗原刺激多种浆细胞多种抗体多种B细胞增殖分化产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。（2）缺陷：（1）方法：向动物体内反复注射某种抗原，从动物血清中分离所需抗体。

二、单克隆抗体及其应用3、科学家发现B淋巴细胞具有的特点：（１）动物体内产生的特异性抗体种类多达百万种；（２）每个B淋巴细胞（浆细胞）只分泌一种特异性的抗体。大量制备单一抗体的思路：体外培养时，B淋巴细胞不具有无限增殖的能力。一个B淋巴细胞克隆细胞群4、一个极富创造性的试验方案：动物细胞融合杂交细胞骨髓瘤细胞（癌细胞，能无限增殖）一个B淋巴细胞（只分泌一种特异性抗体）米尔斯坦【英国】科勒【德国】杂交瘤细胞动物细胞培养单克隆抗体既能迅速大量增殖，又能产生专一抗体。抗体

二、单克隆抗体及其应用

二、单克隆抗体及其应用注射特定抗原从脾脏中获取B淋巴细胞骨髓瘤细胞目的是获得产生特定抗体的B淋巴细胞骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合诱导融合多种杂交细胞培养骨髓瘤细胞5、单克隆抗体的制备过程诱导细胞融合过程中形成的细胞类型：未融合的B淋巴细胞、未融合的骨髓瘤细胞融合的细胞：BB、B-瘤、瘤-瘤选择培养基培养（HAT培养基）第一次筛选：筛选杂交瘤细胞（多种）杂交瘤细胞既能迅速大量增殖又能产生抗体特点

二、单克隆抗体及其应用知识拓展：第一次筛选获得杂交瘤细胞。资料：已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基蝶呤阻断。B淋巴细胞及同型融合细胞不能无限增殖，死亡骨髓瘤细胞及同型融合细胞不能合成DNA，死亡杂交瘤细胞能无限增殖，生长培养基中加入氨基喋呤任务：请根据以上信息，设计一种方法，从培养液中筛选出杂交瘤细胞。①人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途