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利用大肠杆菌高效表达紫芝GsSTS50基因的筛选研究

目录

一、内容综述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3

1.1紫芝GsSTS50基因的功能与特点．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4

1.2大肠杆菌表达系统的优势．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5

1.3研究目的与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6

二、实验材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6

2.1实验材料．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7

2.1.1紫芝GsSTS50基因序列．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8

2.1.2大肠杆菌表达载体．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9

2.1.3试剂与仪器．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10

2.2实验方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．11

2.2.1基因克隆与表达载体构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12

2.2.2大肠杆菌转化与筛选．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13

2.2.3重组蛋白的表达与纯化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14

2.2.4活性检测与性能分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15

三、实验结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．16

3.1基因克隆与载体构建结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17

3.1.1紫芝GsSTS50基因序列分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18

3.1.2表达载体构建及鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19

3.2大肠杆菌转化及筛选结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20

3.2.1细菌转化过程．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21

3.2.2重组菌落筛选及鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21

3.3重组蛋白表达与纯化结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22

3.3.1重组蛋白的表达．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23

3.3.2重组蛋白的纯化及鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．24

3.4活性检测与性能分析结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25

3.4.1重组蛋白活性检测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26

3.4.2重组蛋白性能分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28

四、分析与讨论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．29

4.1实验结果分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30

4.1.1紫芝GsSTS50基因序列特点分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30

4.1.2重组蛋白表达效率分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31

4.1.3重组蛋白活性及性能分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32

4.2结果讨论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．33

4.2.1大肠杆菌表达系统的适用性讨论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．34

4.2.2重组蛋白表达优化策略讨论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．35

五、结论与展望．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．37

5.1研究结论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．37

5.1.1成功克隆紫芝GsSTS50基因并