第十章高效液相色谱法叶桦珍福建卫生89课件.pptx

第十章高效液相色谱法;教学目标;;一、色谱柱相关条件的选择;化学键合相

化学键合相是利用化学反应通过共价键将有机分子键合到载体表面，形成牢固、均一的单分子薄层。;不易流失，稳定性高，色谱柱使用寿命长；

均一的单分子薄层，传质阻力小，传质快，柱效高；

分离选择性高，适用于不同性质物质的分离；

可用于梯度洗脱，重现性高；

载样量大。;2.化学键合相的分类;（二）色谱柱规格的选择

常用的分析型色谱柱柱长10cm～25cm，内径2.1mm～4.6mm，填料粒径3～10μm,用于常规的分离分析。

半制备柱与制备柱内径一般在6mm以上，用于制备目的。

快速分析柱的内径一般为6mm或更大，柱长30?80mm，填料粒径为3um或者更小,适应于快速分析需求。

微径柱内径1mm或更小内径的毛细管柱，适应于电色谱等特殊需要。;（三）色谱柱柱温的选择

色谱柱柱温会影响分离效果和分析时间，柱温的波动会影响分析结果的重现性，实验中应维持柱温的恒定。如无特殊说明色谱柱温度系指室温，色谱柱的最高使用柱温为60度调高柱温会加快传质，缩短分析时间。;二、流动相相关条件的选择;（二）流动相种类的选择;3.流动相洗脱方式的选择;应用梯度洗脱时，应注意以下问题：

（1)所用溶剂的纯度要很高

（2)溶剂间要有互溶性

（3)混合溶剂的粘度会随组成而变化，在梯度洗脱时会出现压力的变化?

（4)应用缓冲溶液与有机溶剂混合时可能会析出盐的结晶体，尤其使用

磷酸盐时需特别小心。

（5)进行样品分析前必须进行空白梯度洗脱，以辩认溶剂杂质峰。;（三）流动相应用要求;三、检测器的选择