高效液相色谱法Thinlayerchromatography课件.pptx

高效液相色谱法High-performanceliquidchromatographyThinlayerchromatography广州卫生职业技术学院

Iodometry一基本原理高效液相色谱法（HPLC）是以液体作为流动相，高效填充剂作固定相的色谱法。具高效、高速、高灵敏度、高自动化、应用范围广、选择性高等优势。涡流扩散项（A）固定相粒度细而均匀，具较高柱效，该项影响较小。纵向扩散项（B/u）液体的黏度大，柱温低，该项可忽略传质阻力项（Cu）固定相的颗粒和流动相的黏度来决定速率理论

Iodometry一基本原理为了获取最佳的实验结果，HPLC的实验条件应满足：(1)固定相(2)流动相(3)柱温粒度小而均匀的球形化学键合固定相。低黏度、低流速的流动相。适宜的柱温。

Iodometry二、高效液相色谱仪由输液系统、进样系统、分离系统、检测系统和数据处理系统五部分组成。1输液系统（高压输液泵）2进样系统（进样器）3分离系统（色谱柱）4检测系统（检测器）5数据处理系统

1、输液系统Iodometry二、高效液相色谱仪贮液瓶、过滤与脱气装置、高压输液泵和梯度洗脱装置组成。其中高压泵是最重要的组成部件。等度洗脱梯度洗脱洗脱过程中流动相组成保持恒定不变，适用于组分少、性质差异小的一般组分分析。洗脱过程中可根据程序设定进行流动相组成比例的不断改变，适用组分多、性质差异大的复杂组分分析

2、进样系统Iodometry二、高效液相色谱仪手动进样来自泵来自泵充样位置（load)进样位置(inject)至废液至废液至色谱柱至色谱柱自动进样：适用于大量样品分析

3、分离系统Iodometry二、高效液相色谱仪色谱柱是HPLC的核心部件，由柱管和固定相组成。柱管：内壁高度抛光的直形不锈钢管固定相：细小而均匀的填料来进行高压匀浆装柱使用过程注意避免色谱柱出现堵塞或污染的情况

4、检测系统Iodometry二、高效液相色谱仪灵敏度、精密度和重现性较好，线性范围宽的优势，是HPLC中应用最广泛的一类检测器。灵敏度高（检测限可达到pg级）、选择性好的特点，适用于痕量分析。通用型检测器。但其灵敏度较低，需恒温检测，且不能用于梯度洗脱。紫外-可见光检测器（UV-vis）荧光检测器（FID）示差折光率检测器（RID）

5、数据处理系统Iodometry二、高效液相色谱仪利用色谱工作站来进行色谱数据的采集、分析及结果处理，获取保留时间、峰高、峰宽、分离度及拖尾因子等色谱参数。色谱工作站色谱数据采集，处理

1.固定相Iodometry非极性键合相为十八烷基（C18）、辛烷基（C8）等非极性基团，常用于反相键合相色谱法中等极性键合相键合醚基，常用于正相或反相键合相色谱法，应用较少化学键合相固定相作为HPLC中最常用的固定相。可根据键合基团的极性情况分为3类。-CN、-NH2等极性较大的基团，常用于正相键合色谱法极性键合相三、固定相和流动相

2.流动相Iodometry三、固定相和流动相(1)脱气用前需用微孔滤膜过滤并进行脱气操作。(2)物理性质(3)匹配检测器(4)化学性质选择黏度低，纯度高的流动相如甲醇、乙腈。流动相必须与所使用的检测器相匹配。稳定性好，同时能够对样品具有良好的溶解度。应满足以下四点要求

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