感染性疾病的临床分子生物学检验分子生物学检验技术生物化学检验教研室课件.pptx

分子生物学检验技术“感染性疾病”的临床分子生物学检验生物化学检验教研室

感染性疾病指致病微生物（包括细菌、病毒、真菌和寄生虫、衣原体、支原体、立克次体等）病原体及其产物通过不同方式引起人体发生感染并出现临床症状的疾病。大约70%的人类感染性疾病是由病毒引起的，有超过400种以上的病毒可感染人类。传染病是感染性疾病的一种特殊类型，归类于感染性疾病，由传染源协带病原体，通过一定的传播途径进行播散的疾病。

感染性疾病由外界致病病原体侵入人体后导致，如伤寒、病毒性肝炎。外源性感染内源性感染指由人体自身的正常菌群，在人体免疫功能下降时引起的感染，因这些细菌必须在一定条件下才能致病，所以又称条件致病菌。如，肠道菌群中的大肠杆菌、肠球菌等。

感染性疾病分类01按病原体分类：可分为细菌、真菌、病毒、支原体、衣原体等。02按病原体来源分类：可分为內源性感染和外源性感染。03按疾病特征分类：阴性感染（亚临床感染）、潜伏感染、显性感染（按病情缓急分为急性感染、慢性感染；按感染部位分为局部感染和全身感染）。

常用诊断技术（一）形态学检测技术01光镜检查是确定很多感染性疾病病原体的最基本和快速的方法。02电镜检查主要对病毒感染尤其具有快速诊断价值。03分离培养使感染性疾病得以确诊，而且以此建立的药敏试验可指导临床合理用药。

常用诊断技术（二）免疫学检测技术01免疫荧光技术（IFA）用荧光素标记抗体分子，借助荧光显微镜检测相应抗原。广泛应用于病毒感染性疾病。02酶免疫技术（EIA）高度特异性和敏感性。03间接凝集反应常用于流行病学调查和筛选阳性标本。直接检出细菌抗原，有利于早期诊断。

常用诊断技术（三）流式细胞术（FCM）可快速多参数分析细胞特征，显示细胞的DNA,RNA水平和体积大小。临床上逐步用于多种细菌、病毒、真菌、寄生虫的检测技术及鉴定。常规检测方法，受到敏感性、特异性限制，不易早期诊断，并且不易提供病原体分型及耐药性方面的信息。

常用诊断技术（四）基因诊断技术01核酸杂交技术：常用斑点杂交、Southern印迹、Northern印迹、原位杂交等。特异性比免疫学检测更高。02核酸扩增技术03基因定量诊断技术：实时荧光定量PCR法为目前应用最广的基因定量诊断技术。用于病情评估、疗效预测、预后判断等。具有重要临床应用价值。04基因芯片技术：可用于病原体变异株、基因分型、耐药基因等检测。

PCR项目编号代码

一、感染性疾病的诊断和治疗监测对病原生物进行种属鉴定、基因分型、耐药诊断和治疗过程中的疗效监测、流行病学调查等。如：病毒性肝炎SARS结核病艾滋病人禽流感新冠状病毒……

感染性疾病的分子生物学检验策略一般性检出策略（检出病原体）完整性检出策略判断有无感染是何种病原体感染常用方法：PCR＋杂交检出病原体分型（分类）－亚型－耐药性常用方法：杂交、PCR、基因芯片、DNA测序

病毒基因检测对病毒特异性基因序列和基因结构进行直接测定。检测方法病毒基因保守序列的扩增检测特异性核酸序列杂交基因芯片技术支链DNA技限制性片段长度多态性分析基因序列测定

病毒基因检测确定病毒存在与否。通常选择病毒基因组保守序列作为检测，来设计PCR引物或制备特异性探针。一般检测策略完整性检出策略进一步检测病毒载量、进行病毒基因分型、亚型鉴定、病毒耐药基因分析。

病毒基因检测HBV、HPVHCV、HIV其DNA可以使用点杂交、PCR方法直接检出其RNA可以使用RT-PCR方法直接检出

（一）乙型肝炎病毒全世界有3.5亿慢性携带者，75%在亚太地区；每年有一百万人死于HBV感染，是全球范围内第9位死因；中国：50%~70%的人受过感染，8%~12%是HBV携带者；肝炎患者中60%是慢性肝炎患者，导致肝硬化，HBV又与原发性肝癌密切相关。

（一）乙型肝炎病毒HBV是一种DNA病毒属于嗜肝DNA病毒科。根据目前所知，HBV就只对人和猩猩有易感性，引发乙型病毒性肝炎疾病。完整的乙肝病毒成颗粒状,丹娜颗粒（Dane）。1965年由丹娜发现。直径为42nm。颗粒分为外壳和核心两部分。

（一）乙型肝炎病毒HBV结构示意图外壳（HBsAg）外壳蛋白成分为表面抗原核心（HBcAg）DNADNA聚合酶HBcAg

（一）乙型肝炎病毒基因组长3.2kb，两条链长度不等。长链为负链，长度固定，携带病毒全部编码信息，为模板编码病毒蛋白。短链为正链,在不同的分子中长度不等，约为负链的50%-100%。

（一）乙型肝炎病毒负链DNA核苷酸序列上含有6个开放阅读框，其中S、C、P、X共4个ORF是早已公认的。多个ORF可读码两次以上，编码2个以上蛋白质。

S基因区编码外膜蛋白前S1区前S2区S区（HBsAg）主要外膜蛋白前S区与病毒的嗜肝性有关

C基因区前C区C区87个核苷酸组成，编码29个氨基酸残基组