药物分析课件第13章A生化药物和基因工程药物分析概念.ppt

梯度洗脱：盐的浓度增大。尽量避免使用卤流动相：0.3mol/L～1.0mol/L的盐的缓冲液。特点：可回收活性蛋白。测定对象：蛋白质，多肽素类盐柱：离子交换键合相2）HPIEC第十三章生化药物和基因工程药物

分析概念基本要求概述质量检验的基本程序与方法常用定量分析方法及其应用练习与思考02010304掌握本类药物质量检验的基本程序与方法类型。熟悉本类药物的范围、种类、质量控制的要点。掌握HPLC法和酶活力测定法在本类药物测定中的应用。了解本类药物含量测定的其他方法。基本要求一、防病、治病的三大药源第一节概述生化药物：

例：氨基酸、多肽、蛋白质、酶等。基因工程药物：以DNA重组技术生产的蛋白质、多肽、酶、激素、疫苗、单克隆抗体和细胞生长因子类药物。DNA重组技术（基因工程）：生产过程为天然基因合成的核苷酸序列内切酶连接酶载体重组的遗传物质转移到宿主细胞增殖、表达分离纯化目的产物氨基酸、多肽与蛋白质类01酶类与辅酶类02多糖类03脂质类04核酸及其降解物和衍生物类药物05生化药物06二、种类基因工程药物的种类01激素类及神经递质类药物：

人生长激素释放抑制因子、人胰岛素、人生长激素02细胞因子类药物：

人干扰素人白细胞介素、集落刺激因子、促红细胞生成素03酶类及凝血因子类药物04生物体的基本生化成分1分子量大:分子量测定2结构难确证3全过程的质量控制：原料、生产过程、

最终产品4生物活性检查5三、特点安全性检查效价（含量）测定：

理化法：有效成分的含量

效价测定和酶活力测定：有效成分的生物活性12生化药物和基因药物质量控制的项目：

来源与种类纯度

性状干燥失重或水分

鉴别炽灼残渣

氨酸组分分析生物活性

肽图热源试验

糖含量含量分析01第二节质量检验的基本程序与方法02鉴别理化鉴别法：化学鉴别法

紫外分光光度法

HPLC法

生化鉴别法：酶法

电泳法

等电聚焦法

生物鉴别法：家兔惊厥试验1201理化鉴别法02化学鉴别法：03例：溶菌酶-CONH-+Cu2+络合显色02紫外分光光度法溶剂：0.01mol/L盐酸例：三磷酸腺苷二钠浓度：20μg/ml判断：λmax：257±1nmA250/A260：0.17～0.27。HPLC法：利用对照品溶液和供试品溶液色谱图的保留时间和肽图谱的一致性进行鉴别。01酶法：例：尿激酶的鉴别---气泡上升法原理：方法：取小试管，加入尿激酶巴比妥溶液、牛纤维蛋白原溶液，再依次加入牛纤维蛋白溶酶原溶液、牛凝血酶溶液，迅速摇匀，立即置37℃±0.5℃恒温水浴保温，记时。反应系统在30～40秒内凝结，凝结块内有气泡生成，15分钟内凝结块溶解，当凝结块溶解时，气泡逐渐上升。以0.9%氯化钠作空白，同法操作，凝结块在2小时内不溶。电泳法：以肝素鉴别为例。01与国家肝素标准品对照，其移动位置相应。02利用生物体进行试验来鉴别药物。01例：家兔惊厥试验鉴别胰岛素。02利用胰岛素的降糖作用。给家兔大剂量注射胰岛素，家兔惊厥，迅速静注50%GS，惊厥停止。03生物法：杂质检查一般杂质检查

特殊杂质检查：原料药纯度分析

生产过程中杂质的检查原料药纯度分析：

多糖类-----低聚糖、核酸、蛋白质

酶类药物-----酶催化反应基本产物的分析，具有一定活性的其他有关酶的检查。选用N-乙酰-L-酪氨酸乙酯作底物进行糜蛋白酶的限度检查。糜蛋白酶的限度为2500个胰蛋白酶单位中不得大于50单位，按每1mg胰蛋白酶为2500个单位和每1mg糜蛋白酶为1000单位，折算成重量，则糜蛋白酶的限度为5%（g/g）。12生产过程中杂质的检查31000=x:50x=0.05（mg）L=0.05/1=5%例：胰蛋白酶中糜蛋白酶的检查过敏试验：异性蛋白

降压物质试验：导致血压降低的杂质、组

胺、类组胺热源试验

异常毒性试验:急性毒性物质（三）安全性试验无菌试验：活菌基因工程药物中可能杂质与污染物检