细胞的芽孢染色法目的及要求.ppt

细胞的芽孢染色法

一、实验目的及要求

学习并掌握细菌的芽胞染色法，初步了解芽孢杆菌的形态特征。

二、实验原理

芽胞又称内生孢子，能否形成芽孢及芽孢的形状、芽孢在孢囊的位置、芽孢囊是否膨大等特征是鉴定细菌的依据之一。

芽胞壁厚，透性低，不易着色，一般染色法只能使菌体着色而芽胞不着色（芽胞呈无色透明状），而一旦染上色后又难以脱色。

芽胞染色法根据芽胞特点设计，除了用着色力强的染料外，还需要加热，以促进芽胞着色。当染芽胞时，菌体也会着色，然后水洗，芽胞染上的颜色难以渗出，而菌体会脱色。然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和芽胞呈现出不同的颜色，因而能更明显地衬托出芽胞，便于观察。

三、实验器材

1.菌种：枯草芽孢杆菌。

2.染色剂：5%孔雀绿水溶液、0.5%番红水溶液

3.仪器、材料：二甲苯、香柏油、蒸馏水、95%乙醇、显微镜、接种环、酒精灯、载玻片、盖玻片、擦镜纸、吸水纸。

四、实验方法（Schaeffer－Fulton氏染色法）

1.制片：常规方法涂片、干燥、固定。

2.染色：(1)涂片上滴加3－5滴5%孔雀绿水溶液。

(2)用试管夹夹住载玻片一端，微火加热，自载玻片上出现蒸汽时，计时5min。加热过程中切勿使染料蒸干，及时补加染液。待玻片冷却后，用自来水冲洗至孔雀绿不再褪色为止。

(3)0.5%碱性番红复染2min，水洗。

(4)制片干燥后油镜观察。芽孢呈绿色，菌体红色

五、实验报告

绘图标识枯草芽孢杆菌及芽孢形态，芽孢的着生位置。

六、思考题

1．为什么芽孢染色要加热为什么芽孢及营养体能染成不同的颜色

2．试设计实验如何鉴定某一产芽孢菌株的芽孢形态、着生位置及所属分类地位。

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