研究黄芪精中黄芪甲苷.pptVIP

七．对策实施实施一：色谱条件的确定1.仪器与试药Agilent1100高效液相色谱仪；Attech2000蒸发光散射检测器；梅特勒AG285电子天平。黄芪精；天津农药总厂D101型大孔吸附树脂；甲醇、乙腈为色谱纯；95%乙醇为分析纯；水为超纯水。取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇溶解，配制成0.1mg?ml-1的对照品溶液。供试品溶液的制备精密量取本品10ml，置分液漏斗中，加水10ml，摇匀，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次20ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇10ml使溶解，0.45μm有机系微孔滤膜滤过，即得。01022.对照品溶液的制备4.色谱条件的确定色谱条件筛选图1色谱柱：AgilentXDB-C18柱（4.6×150mm，5μm）流动相：乙腈-水(40：60)柱温：40℃流速：1.2ml·min-1mAu100200300400500600700ADC1A,ADC1CHANNELA(ZJP\HQJ21528.D)7.917色谱条件筛选图2色谱柱：AgilentXDB-C18柱（4.6×150mm，5μm）流动相：乙腈-水(40：60)柱温：40℃流速：1.0ml·min-1色谱条件筛选图3色谱柱：AgilentXDB-C18柱（4.6×150mm，5μm）流动相：乙腈-水(40：60)柱温：40℃流速：0.9ml·min-1色谱条件筛选图4色谱柱：AgilentXDB-C18柱（4.6×150mm，5μm）流动相：乙腈-水(40：60)柱温：40℃流速：0.9ml·min-1色谱条件筛选图5色谱柱：AgilentXDB-C18柱（4.6×150mm，5μm）流动相：乙腈-水(32：68)柱温：40℃流速：1.0ml·min-1色谱条件筛选图6色谱柱：AgilentXDB-C18柱（4.6×150mm，5μm）流动相：乙腈-水(32：68)柱温：40℃流速：1.0ml·min-1色谱条件筛选图7色谱柱：DikmaDiamonsilTM（钻石）C18柱(4.6×250mm,5μm)流动相：乙腈-水(40：60)柱温：40℃流速：1.0ml·min-1前延峰12色谱条件选择情况汇总表色谱柱流动相不同流速（ml·min-1）下的对照品溶液色谱峰分离情况不同流速（ml·min-1）下的供试品溶液色谱峰分离情况0.91.01.20.91.01.2AgilentXDB-C18柱（4.6×150mm，5μm）乙腈-水(40：60)峰形对称；目标峰与相邻峰分离度大于1.5，保留时间适中峰形对称；目标峰与相邻峰分离度大于1.5，保留时间适中DikmaDiamonsilTM（钻石）C18柱（4.6×250mm，5μm）乙腈-水(40：60)峰形对称；目标峰与相邻峰分离度大于1.5，tR＞10min峰形对称；目标峰与相邻峰分离度大于1.5，tR＞10minAgilentXDB-C18柱（4.6×150mm，5μm）乙腈-水(32：68)峰形对称；目标峰与相邻峰分离度大于1.5，tR＞10min峰形对称；目标峰与相邻峰分离度大于1.5，tR＞10minDikmaDiamonsilTM（钻石）C18柱（4.6×250mm，5μm）乙腈-水(32：68)峰形较对称；目标峰与相邻峰分离度大于1.5，tR＞10min峰形较对称；目标峰与相邻峰分离度大于1.5，tR＞10min因此，可以选择AgilentXDB-C18柱（4.6×150mm，5μm）、以乙腈-水(32：68)为流动相，流速为1.0ml·min-1进行后续试验。供试品溶液的制备精密量取本品10ml，置分液漏斗中，加水10ml，摇匀，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次20ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱，以水50ml洗脱，弃去水液，再用A％乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液，继用B％乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得。0102实施二：供试品前处理方法的选择提取分离条件的确定收集上述水液和各拟弃去的乙醇洗脱液，蒸干，加甲醇适量使溶解，得溶液C按照上述色谱条件分别进样20μl，记录色谱峰面积。各拟弃去的乙醇洗脱液蒸干，加甲醇适量使溶解，得溶液C水液30%40%