细菌计数生长筛选诱变第三节.pptVIP

1发生Ⅰ.随机性结果Ⅱ.无定向性2基因突变在哪一个细菌中发生是随机的，突变基因的部位也是随机的。突变的发生没有固定的方向。3频率Ⅲ.稀有性可Ⅳ.诱变性4突变率（每一细菌在每一世代中发生某一性状突变的机率）通常为10-5~10-10。十万至一百亿个细菌中才可能有一个细菌的基因发生突变。5人工诱变可提高10～105倍A．基因突变的特点.可逆性01010203040506修复成功.稳定性修复失败产生的变异性状是稳定的、可遗传的。利用基因突变的特点，可以通过人工诱变进行细菌的基因改造。0203040506”常用的诱变剂：紫外线、5—溴尿嘧啶、亚硝酸、卟啶染料等。诱变的步骤.制出发菌株的单细菌悬浮液提问：为什么？如何在整个过程中尽量使细菌分散呢？诱变剂与细菌充分接触；向细菌培养液中加入玻璃珠，并保持在诱变过程中始终进行振荡搅拌形成出发细菌的单细菌悬浮液；方法Ⅱ.选择合适的诱变剂剂量进行诱变提问：为什么要有剂量限制呢？少,效率低;过高“是药三分毒”会造成细菌大量死亡。例如在进行细菌紫外诱变时，通常使用15或20W的紫外灯距离细菌单细菌悬浮液15~30cm，照射15~20min。Ⅲ.筛选突变出的高效菌提问：如何筛？选择性培养基:抑制不需要的性状：如抗性筛选、抗渗透压筛选；还需添加必需的营养，如缺陷型菌株的筛选。综合评价诱变法潜力要远大于诱导法，但操作复杂。在实际诱变中，往往要经过几次不同诱变方法的诱变处理以及大量繁琐的筛选分离工作才有可能获得理想的突变体。最后这些突变体将会在实验室小试、中试的基础上被投放到生产实践中。（3）基因重组法01不同个体基因重新组合02A．形式03自发基因重组与人工基因重组04自发基因重组05a.真核生物为杂交；06精卵细胞质融合过程中所有遗传物质的重组07b.原核生物为转化、转导、接合；08部分遗传物质的转移和重组Ⅰ.转化Transformation（引进）供体细菌研碎物中的DNA片段直接吸收进入活的受体细菌并发生基因重新组合的方式。受体细菌获得了供体细菌的部分遗传性状—“转运同化”如：抗性质粒引进目前发现自然状态下许多其它细菌、放线菌、真菌和高等动植物中都也有转化现象。.接合（合作）.转导（间谍窃取）噬菌体－细菌病毒通过噬菌体的携带而转移导入的基因重组现象称为转导。转导是1951年辛德尔(Zinder)和莱德贝尔格(1Jederberg)在研究鼠沙门氏伤寒杆菌重组时发现的。细菌有性生殖*****第二章工业微生物基础第三节微生物菌种的分离选育和保藏微生物菌种是工业发酵生产的基本条件。发酵的产量、发酵原料的利用率、生产周期等均与菌种有关。基础知识细菌生长（数量）测定方法借助显微镜观察测定优点：快速提问:有哪些缺点?缺点：不能区分细菌的死活另外主要的一种就是平板培养计数。1.涂片染色法1视野菌液(ml)＝(0.01ml／1cm2)*视野面积(cm2)2.计数器(血球计数板）测定法0.052cm2×250.1ml菌液提问：数了125个小格中有90个细菌，样品中的细菌浓度是多少？(90个÷125)*400/0.1ml=2880个/ml适用范围：测定个体较大的细菌或原生动物细菌个体若太小、过多，由于每一小格中细菌层层叠加，相互遮挡，难以准确计数。数数细菌（或其他微生物或细胞）数目，（一般数125个小格），折算样品细菌浓度；123.比例计数法比例——样品菌液与等体积的血液混合，观测二者比例提问：如果平均每个视野中细菌数量/红血球的数量比例为5.5：1，则细菌数量=？5.5×400万个/ml=2.2×107个/mL样品红血球数已知(男性400~500万个／ml，女性350~450万个／ml)，平均400万个/ml细菌红血球4．比浊计数法浊——细菌悬浮液的浊度提问：如何定量二者关系呢？细菌不完全透光，一定范围内菌溶液的混浊度与菌数量成正比STEP1STEP2STEP3将待测样品制成菌悬液；菌悬液用10倍稀释法适当稀释；定量取稀释液（0.2ml）涂平板培养，根据平板上生长的菌落计数；特点：活菌计数，适用于单细胞微生物；要点：同一稀释度涂布三皿以上取平均值计数；每支移液管或枪头只能接触一个稀释度的菌液；5、平板计数法稀释涂平板法活菌计数稀释涂平板法活菌计数一、微生物菌种的分离定向培育—“教育培训”选育—筛选与定向培育筛选—“众里挑一”收集长期被石油污染的土壤(天然选择性固体培养基），必有适应石油环境