非小细胞肺癌基因检测.ppt

-*-ANNUALBUSINESSREVIEW关于非小细胞肺癌基因检测第1页，共27页，星期日，2025年，2月5日前言随着分子医学进展和靶向药物的不断涌现，晚期非小细胞肺癌（NSCLC）的治疗已进入到个体化治疗的时代。目前临床应用的个体化靶向治疗主要针对EGFR突变型和ALK融合基因型肺癌,这两种基因变异型肺癌均具有明确的分子靶点、靶点检测技术及上市的靶向药物，临床疗效得到明显提高。第2页，共27页，星期日，2025年，2月5日EGFR突变检测中需要明确的几个基本概念2、基因突变是指DNA发生碱基序列的改变：须选择有针对性的检测手段，针对非DNA的检测手段如：RT-PCR（检测RNA表达），免疫组化（检测蛋白表达）以及针对非碱基序列的检测手段如：FISH（检测DNA的扩增、缺失、断裂、融合）等，均不适用。体细胞突变发生在非种系组织中不具有遗传性不会遗传给子代种系突变发生于精子或卵子中可以遗传子代子代所有细胞均带突变1、EGFR突变为体细胞突变：发生于肿瘤细胞中，正常细胞（癌旁或白细胞等）不含突变。要尽可能取到足量的肿瘤细胞进行检测，这是保证检测结果可靠的根本前提。第3页，共27页，星期日，2025年，2月5日EGFR基因突变检测概念EGFR突变检测指肿瘤组织中编码EGFR基因的DNA突变状态检测并不是：EGFR基因DNA拷贝数的检测（FISH法）EGFR蛋白表达量的检测（IHC法）。EGFR检测检测物质部位方法基因突变DNA细胞核测序法、ARMS法等拷贝数DNA细胞核荧光原位杂交法（FISH）蛋白表达蛋白质细胞膜免疫组化法（IHC）RNA表达RNA细胞核RT-PCRX第4页，共27页，星期日，2025年，2月5日NatureReview2007,7:169NSCLC中EGFR酪氨酸激酶区突变种类第5页，共27页，星期日，2025年，2月5日第6页，共27页，星期日，2025年，2月5日标本采集及病理评估DNA抽提及质控检测报告EGFR突变检测ARMS测序法其它方法EGFR突变检测流程第7页，共27页，星期日，2025年，2月5日EGFR突变检测中的相关角色患者临床医生胸外科医师内镜医师收集肺癌组织标本病理科医生准备样本实验操作及结果分析实验室人员报告结果给临床医生肿瘤科医生放疗科医生呼吸科医生第8页，共27页，星期日，2025年，2月5日用于EGFR突变检测的标本肿瘤组织—目前最可靠的标本；其它样本：外周血（血浆、血清）细胞学（胸水、痰液细胞学）支气管刮取物仍需进一步研究确定这些样本在临床实践及诊断中的应用第9页，共27页，星期日，2025年，2月5日标本问题石蜡组织：尽可能送检一年内的石蜡标本。石蜡切片：含肿瘤细胞越多越好（50%以上）；组织部位面积约6mmx6mm以上；包埋组织：组织块不小于0.5×0.5×0.5（cm）。?新鲜组织：比石蜡等处理过的旧组织，DNA保存得更完整，对PCR实验更有利，但一定要经病理学确认。含有肿瘤组织50%以上；重量≥10ｍg（约米粒大小以上），经PBS或生理盐水冲洗干净。取癌组织的中心位置组织块（避开坏死区域），固定于10%中性福尔马林溶液中，尽快送病理科。细胞学标本：可用原发灶与复发灶：只要能获得足够的癌细胞，均可；但对于复发的患者，再次活检不仅可确诊，还可以获得分子标志物的进一步信息。第10页，共27页，星期日，2025年，2月5日标本因素对EGFR突变检测的影响--肿瘤组织特点--遗传异质性对检测方法敏感度有较高要求正常细胞混杂第11页，共27页，星期日，2025年，2月5日标本因素对EGFR突变检测的影响--组织标本种类--对检测方法有相应要求，组织标本及DNA质控尤其重要冰冻新鲜组织固定包埋组织--外科手术标本 完整，量多 广泛--小活检标本 完整，量少 受限--外科手术标本 片段化，量多 受限--小活检标本 片段化，量少 极度受限DNA质与量 适用方法第12页，共27页，星期日，2025年，2月5日图4.EGFR基因检测使用的临床样本及其操作。A.被切成10微米的石蜡包埋标本。B.在支气管镜下将刷检样本放在生理盐水中洗净（悬浮），可以就这样冷冻保存，C.进一步将该生理盐水液离心，沉淀溶解于AL缓冲液，此状态可以室温保存。第13页，共27页，星期日，2025年，2月5日肿瘤组织标本的采集及病理评估肿瘤组织标本病理学评估组织切片非小细胞性