生物酶解技术.ppt

总黄酮的UV法测定法标准曲线的制备:将芦丁于120℃烘箱中烘于干燥器中冷,却后称至恒重，称取50mg用70%乙醇溶解,定容至250mL,得0.200mg/mL芦丁对照品溶液。准确吸取芦丁对照品溶液0、3.0、6.0、9.0、12.0、15.0mL于50mL量瓶中,加入5%NaNO2溶液15mL,摇匀,放置6min后加入10%Al(NO3)3溶液15mL,摇匀,放置6min后加入4%NaOH溶液20mL,再用70%乙醇定容,摇匀,第30页，共66页，星期日，2025年，2月5日以70%乙醇为空白参比,10min后用1cm比色皿于510nm测定吸光度,得芦丁的回归方程:Y=0.0749A+0.0022(R2=0.9961)。苦荞茎总黄酮的测定:准确称取2.50g苦荞茎叶粉,于250mL三角瓶中,加入50mL水,按试验设置的处理条件,在不同的加酶量、酶解温度和pH值条件下,酶解不同的时间,然后升温至90℃提取,离心去沉淀,用70%乙醇定容至200mL,作为待测液。取3mL待测液于50mL量瓶中,按照标准曲线的制备项下方法测定吸光度,计算总黄酮的质量,并计算总黄酮得率(总黄酮得率=提取液中总黄酮质量/苦荞茎叶粉质量×100%)。第31页，共66页，星期日，2025年，2月5日单因素考查法（一）温度第32页，共66页，星期日，2025年，2月5日（二）酶用量酶解温度55，pH6.5酶解2小时纤维素酶第33页，共66页，星期日，2025年，2月5日（三）酸碱度固定纤维素酶的量，酶解温度，时间2h，考查pH影响。第34页，共66页，星期日，2025年，2月5日（四）酶解时间固定：纤维素酶量，酶解温度55pH6.5考查不同时间第35页，共66页，星期日，2025年，2月5日二、酶解技术的工艺设计实例1.苦荞茎叶粉中总黄酮酶法提取工艺研究1.酶解液黄酮成分测定2.正交实验设计第36页，共66页，星期日，2025年，2月5日第37页，共66页，星期日，2025年，2月5日由表中可知，各因素对提取效果的影响顺序依次为A＞B＞C即酶解温度酶解时间达到极显著水平（P0.05）最佳工艺组合为A2B2C3第38页，共66页，星期日，2025年，2月5日直接水提和酶法水提效果比较在酶解辅助提取过程中，酶的种类、酶解温度，酶解时间及酸碱度各因素的影响不是孤立的，而是相互影响的，所以要在单因素考查的基础上，通过正交试验综合考虑，以获得更好酶解提取效果。第39页，共66页，星期日，2025年，2月5日第五节酶解技术在中药提取中的应用一、酶解技术在中药成分提取中的应用（一）多糖实例2.甘草多糖的酶辅助提取运用正交设计法设计酶法提取工艺，采用分光光度法测定多糖含量。【结果】酶法提取甘草多糖的最佳工艺是温度40℃、pH值5.0、加酶量5g?kg(-1)、提取时间5h。提取率3.29%酶法提取甘草多糖速度快，提取率高。第40页，共66页，星期日，2025年，2月5日多糖的酶及超声联合提取采用正交试验,优化玉米须多糖的酶及超声提取方案,并研究这两种方案的结合效果.结果三种提取工艺中联合提取多糖得率最高,酶辅助提取次之,超声提取最低.结论联合提取是一条高效的提取路线.

方法超声酶法酶法-超声时间（min)20170190多糖含量%2.8785.6977.720第41页，共66页，星期日，2025年，2月5日（二）生物碱生物碱一般采取方法？酶法辅助提取率比传统方法显著增加，生物碱结构无（)键，不存在被酶水解问题。实例3.贝母生物碱酶辅助提取工艺研究（1）酶解条件单因素考查第42页，共66页，星期日，2025年，2月5日（2）酶解条件正交试验pH温度第43页，共66页，星期日，2025年，2月5日由极差分析得到各因素对提取效果的影响度:ADBC,由此可见,酶解温度为主要因素,酶解时间为次要因素,其次是pH值,而酶用量的影响最小。因此得到最佳提取条件:提取温度为60℃,pH值为45,酶用量为2.5g/L,提取时3.5h第44页，共66页，星期日，2025年，2月5日验证试验:按原醇提取工艺进行3次试验,同时根据正交试验优选结果对酶解工艺进行3次重复试验,结果见表3。可见,两工艺重现性良好,但是加酶工艺比不加酶收率提高了3.92%。第45页，共66页，星期日，2025年，2月5日二、酶解技术在中药成分转化中的应用

研究证明,白藜芦醇具有抗菌、抗癌、抗炎、