组织培养技术的基本理论知识.pptVIP

体外培养的大鼠主动脉平滑肌细胞游走型细胞具有类似巨噬细胞样的特征。经常处于较活跃的变形及游走状态，因此外形不规则且不断变化。当细胞密度增大相互连接成片时，游走受限，形状上类似上皮型细胞或成纤维细胞型的细胞。表现这种形态的细胞主要是具有吞噬作用的单核巨噬细胞系统的细胞，如颗粒性白细胞、淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞、肝枯否细胞(Kupffercell)以及某些肿瘤细胞等。01020301多形型细胞02多形型细胞是一些形态上不规则的细胞，但03它不像成纤维细胞型的细胞那样，不规则形04态由宽扁的胞质突起所致。其细胞一般分胞05体和胞突两部分。胞突为细长形，似丝状伪06足。胞体虽略呈多角形，但没有成纤维细胞07型那样不规则。体外培养中呈现多形型的细08胞最常见的类型是神经元和神经胶质细胞。细胞形态并非固定不变，可随培养条件、生长时期、细胞数量等而变化02注意：01若要确定某一培养物的确切细胞类型，必须借助更为特异的鉴定方法，如进行组织化学或免疫细胞化学染色鉴定。04细胞形态只是对培养物判断或识别的参考指标03悬浮或贴附悬浮贴附

圆形成纤维或上皮样

转化与否未转化转化后成纤维样可成上皮样生长状态改变培养细胞形态不稳定血清Hela高血清低血清

成纤维细胞样上皮样细胞

pHHela太酸或太碱标准pH

成纤维细胞样上皮样细胞细胞密度3T3低密度高密度

成纤维细胞样上皮样细胞概念培养时不贴附于底物而呈悬浮状态生长来源来自血，脾或骨髓，尤以血中白细胞肿瘤细胞也可能特点在悬浮中生长良好细胞圆形，单个或小细胞团悬浮生长型生存空间大，提供数量大01传代方便(不需消化)02易于收获03缺点04观察不方便05很多细胞不能悬浮生长(尤以正常细胞)06优点小结：01体外培养细胞的生长类型02粘附型细胞03悬浮型细胞：血细胞以及某些肿瘤细胞04上皮型细胞成纤维型细胞游走型细胞多形型细胞05分化特征逐渐减弱，原本各种各样的分化细胞，逐渐失去各自的形态与功能“个性”，表现出某种趋同性，这种现象被称为去分化或脱分化01培养细胞的增殖能力分裂增殖和生长发育是体外培养细胞的两大生命特征;增殖能力一般与该种细胞在体内的增殖能力相仿。02培养细胞分化状态的变化单个细胞的生长过程：ＤＮＡ合成细胞分裂复习：细胞周期＝Ｇ１＋Ｓ＋Ｇ２＋Ｍ培养细胞的生长过程原代培养期传代期衰退期二、培养细胞的生长和增殖过程细胞周期(Cellcycle)：01指细胞从前一次分裂结束开始至本次分裂结02束所经历的过程。常分为4个时期，即DNA03合成期（S期）、有丝分裂期（M期）、有04丝分裂完成至DNA合成开始的间隙期（G105期）以有DNA复制结束至有丝分裂开始的间06隙期（G2期）。若某种原因（如乏氧、血07清饥饿等）细胞不再沿细胞周期运行，而进08入休眠状态，则称为G0期。09体外培养细胞的整个生命活动过程分期01原代培养：取自体内新鲜组织并置于体外02条件下生长的细胞在传代之前称为原代培03养。04传代培养：细胞在培养器皿中生长一定时05间后，被分开接种到新的培养器皿中继续06培养的过程。组织细胞培养技术第一章细胞培养的基本理论知识组织培养工作开始于20世纪初，Harrison(1907)最早对两栖类胚胎的神经管组织进行了悬滴培养-哈里森悬滴培养法真正开创大规模细胞培养工作是在20世纪40年代，W.Earle和R.Dulbecco设计出了细胞培养液配方，并开始了单细胞的悬液培养，细胞培养工作才得到广泛发展。细胞培养始传我国是20世纪30年代。至50年代以后，组织培养已在我国逐步开展起来组织细胞培养的诞生和发展简史第一节细胞培养基本概念细胞培养(cellculture)基本概念：细胞培养是指从动物体内取出细胞或者组织，模拟体内的生理环境，在无菌、适温和丰富的营养条件下，使离体细胞或者组织生存、生长并维持结构和功能的一门技术。体外培养细胞培养（InVitro）组织培养器官培养01不分02细胞培养(Cellculture)：细胞（包括单个细胞）在