细胞培养与代谢调控.pptVIP

贴附接触抑制密度抑制细胞呈贴壁生长,梭形或不规则形,在粘附因子的作用下，细胞生出伪足，伪足越多，贴壁越好。细胞在生长过程中达到相互接触时停止分裂的现象。因此，贴壁细胞通常都是单层细胞培养状态。细胞接触后，虽发生接触抑制，但只要营养充分，细胞仍会增殖分裂，细胞数量仍在增多。但当细胞密度进一步增大，培养液中营养成分减少，代谢产物增多时，细胞因营养的枯竭和代谢物的影响，则发生密度抑制，导致细胞分裂停止。粘附型细胞分为：01040203成纤维细胞型：似体内成纤维细胞的形态，胞体梭形或不规则三角形，胞质向外伸出2—3个长短不等的突起，中有卵圆形核。生长时排列成放射状，漩涡状，并不紧靠连成片，细胞—细胞接触易断开而单独行动，游离的单独的成纤维样细胞，常有几个伸长的细胞突起。上皮型细胞：类似体内的上皮细胞，扁平，不规则多角形，中有圆形核。生长时易相连成片，相靠—紧密相连—成薄层—铺石状生长时呈膜状移动，很少脱离细胞群而单个活动。游走细胞型：呈散在生长，一般不连成片，胞质常突起，呈活跃游走或变形运动，方向不规则。此型细胞不稳定，有时难以和其他细胞相区别。多形型细胞：有一些细胞，如神经细胞难以确定其规律和稳定的形态，可统归于此类。细胞培养的条件1、无菌、无毒：（1）对培养液和所有用具进行无菌处理（2）添加一定量的抗生素，防治培养过程中的污染（3）定期更换培养液，以便清除代谢产物防治细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害2、全部的营养物质：葡萄糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素、动物血清等。3、适宜的温度和PH值：36.5+0.5度,PH值4、必要的气体条件：O2：细胞代谢所必需的CO2：维持培养液的PH通常采用培养皿或松盖培养瓶将其置于含95%空气和5%CO2的培养箱中进行培养5、其他：光照、湿度等细胞培养的方式根据细胞生长方式分为贴壁培养和悬浮培养两大类；根据细胞代次分为原代培养和传代培养；根据细胞培养操作方式分为：1、固定化培养：通过一些固相的交联化合物将细胞固定于小格中，或者通过共价键交联住细胞，在培养基中进行培养。2、分批培养：将细胞和培养基一次性加入反应器内进行培养，此后细胞不断增长，产物不断形成和积累，最后将培养基连同细胞一并取出，培养结束。3、流加培养：在分批培养的基础上间断地或连续地补加培养基。4、半连续培养：当细胞和培养基一起加入反应器后，在细胞增长和产物形成过程中，每间隔一段时间，取出部分培养物或细胞，然后补充同样数量的新鲜培养基，继续培养。5、连续培养：连续性加入新鲜的培养基，同时取出相同量的旧培养基和细胞。6、灌流培养：当细胞和培养基一起加入反应器后，在细胞增长和产物形成过程中，不断地将部分条件培养基取出，同时不断地补充新鲜培养基。通常用于被固定后的细胞培养。原代培养和传代培养原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。特殊的概念：永生化细胞：正常细胞的生长代谢处于增殖、分化、衰老及凋亡的动态平衡，体外增殖是有限的，培养细胞生命的自然极限称为海弗利克极限。细胞内控制这一系列过程的是一个庞大复杂的细胞调节网络，其中任何一个环节发生错误，都有可能触发细胞内相互关联的一系列信号分子的表达和功能异常，使细胞跨越海弗利克极限，获得不死性，发生永生化。细胞系：指原代细胞培养物经首次传代成功后所繁殖的细胞群体。无限细胞系：细胞永生性也称不死性，即细胞获持久性增殖能力，这样的细胞群体称无限细胞系，也称连续细胞系。有限细胞系：初代培养物开始第一次传代培养后的细胞系的生存期限有限，为有限细胞系。细胞悬液0110代细胞0250代细胞03无限传代04原代培养05传代培养06多数组织细胞固定在表面生长和分裂。07随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖08遗传物质改变09遗传物质未改变10人工诱导癌化11原代培养和传代培养细胞传代及培养方法动物贴壁细胞培养过程取动物组织块用胰蛋白酶处理分散成单个细胞通常选用幼龄动物组织或胚胎细胞（细胞分化程度低，增殖能力强，更易于培养）贴壁细胞传代培养方法-胰酶消化法1、弃掉培养瓶中的培养液；2、加入0.25％的胰蛋白酶液(以消化液能覆盖整个瓶底为准），静置2-10min（显微镜下动态监测）。3、吸去胰蛋白酶液，加入一定量的培养液(以能覆盖整个瓶底为准）。4、用吸管吸取瓶内培养液，反复吹打瓶壁细胞，形成细胞悬液。5、吸取细胞悬液，300g离心2-5min，用新鲜的培养基重悬制备细胞