1.2 微生物的培养技术及应用（第2课时）【知识精研】高二下学期生物人教版选择性必修3.pptx

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数;1、尿素的利用;3、常见的分解尿素的微生物;研究思路;㈠.筛选菌株;培养一定时间后，该菌数量上升，再通过稀释涂布平板法等方法对它进行纯化培养分离。;3、选择培养基;15.0g;（3）上述培养基选择分解尿素的微生物的原理：;怎样证明此培养基具有选择性呢？;;项目;1、显微镜直接计数：;不能区分死菌与活菌；

不适于对运动细菌的计数；

需要相对高的细菌浓度；

个体小的细菌在显微镜下难以观察。;2.间接计数法（活菌计数法）

（1）常用方法：;（3）统计原则：;稀释涂布平板法计算注意事项

①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30—300的平板上进行计数。

②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。

③统计的菌落往往比活菌的实际数目低，因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。

④涂布平板法所选择的稀释度很重要，一般以三个稀释度中的第二个稀释度所出现的平均菌落数在50个左右为最好。;例：两位同学用稀释涂布平板法测定同

一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为

106的培养基中，得到以下两种统计结果。

1、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。

2、乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。

你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问题，错在哪？;提示：甲同学只涂布了1个平板，没有设置重复组，因此结果不有说服力。乙同学考虑到设置重复组的问题，涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数值结果与另外2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值，这两位同学的实验都需要改进。在设计实验时，一定要涂布至少3个平板作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。;;设置对照的主要目的:;实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数目的实验???，A同学从对应的106倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落，但是其他同学在同样的稀释度下只选择出大约50个菌落。分析其原因。;小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。;实验设计;1.土壤取样;1.土壤取样;2.制备培养基;3.样品稀释、取样涂布;（1）测细菌数：一般用104、105、106稀释液

（2）测放线菌：一般用103、104、105稀释液

（3）测真菌数：一般用102、103、104稀释液

;◆实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。;4.微生物的培养、观察并记录结果;一般来说，在一定的培养条件下(相同的培养基、温度及培养时间)，同种微生物表现出稳定的菌落特征，如菌落形状、大小、隆起程度和颜色。;不同种类的细菌形成的菌落，在大小、形状、

光泽度、颜色、硬度、透明度等方面具有一度

的特征，菌落特征可作为菌种鉴定的重要依据。;微生物的培养与观察;5.细菌的计数;操作提示;4、菌种鉴定：;探究1、根据选择培养基的原理，如何筛选出耐酸菌？;提示：稀释涂布平板法计数的值比实际值偏小，原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落；显微技术法计数的结果比实际值偏大，原因是显微镜下无法区分细胞的死活，计数时包括了死细胞。;探究4、为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？

当测定时为什么要将稀释的范围放宽一些？;探究6、统计菌落数目的理论依据是什么？;问题探究;C;;;D;;检测培养基平板灭菌是否合格;灼烧