3.1 重组DNA技术的基本工具【知识精研】高二下学期生物人教版选择性必修3.pptx

;高考考点分析：

24年：T13DNA的粗提取与鉴定

T25①黏性末端②重组载体的筛选

23年：T25质粒适于作基因运载体的特点和条件

22年：T13DNA的粗提取与鉴定

T25限制酶的作用

21年：T13DNA的粗提取与鉴定

T25限制酶、DNA连接酶的作用

20年：T25限制酶、DNA连接酶;;抗虫棉;;;;;;;;;;;;（4）图1和图2分别表示的是EcoRⅠ限制酶和SmaⅠ限制酶的作用示意图。

;（4）图1和图2分别表示的是EcoRⅠ限制酶和SmaⅠ限制酶的作用示意图。

;（5)观察下列限制酶的识别序列和切割位点，回答：

①写出这四种限制酶切割形成的末端。

②不同的限制酶能否切割形成相同的黏性末端？;限制性内切核酸酶(限制酶);;;;;;背诵：

1、“分子手术刀”是指什么？简称？

大多数识别的序列由几个碱基组成？少数有几个？

2、常见的两种上述物质是？切割后分别产生什么末端？

3、“分子缝合针”是指？常见的有哪两种？

连接黏性末端用？连接平末端用？为什么？

4、“分子运输车”是指？（常见3种）

质粒作为载体需具备的条件？

;;;;;;4.图(a)中的三个DNA片段上依次表示出了EcoRⅠ、BamHⅠ和Sau3AⅠ三种限制性内切酶的识别序列与切割位点，

;②BamHⅠ和Sau3AⅠ识别的碱基序列一样吗______。这两种限制酶切割后产生的末端能否被DNA连接酶连接_______

③仅用BamHⅠ能否将目的基因切割下来_______；仅用EcoRⅠ能否将目的基因切割下来______。

④仅用Sau3AⅠ能否将目的基因切割下来_________；切割后的目的基因能否自己链接成环_____。

;⑤用Sau3AⅠ和EcoRⅠ共同作用能否将目的基因切割下来____，切割后的目的基因能否自己连接成环_____。

⑥与仅用Sau3AⅠ切割目的基因相比用Sau3AⅠ和EcoRⅠ共同切割目的基因的优点是

_____________________________________________________.

⑦若仅用Sau3AⅠ切割目的基因，则应用________________________切割质粒。

⑧若用Sau3AⅠ和EcoRⅠ共同切割目的基因，则应用________________________切割质粒。;练习：1.下列操作中选用哪种限制酶切割构建重组DNA分子最好？为什么？

(注：AmpR表示氨苄青霉素抗性基因，neo表示新霉素抗性基因)

;2.选用下图载体??目的基因导入细菌中并将含有目的基因的细菌筛选出来

①在培养细菌的培养基中添加抗生素B，则应选择的限制酶为______

②在培养细菌的培养基中添加抗生素A，则应选择的限制酶为______;;;04;1.取材、研磨;1.取材、研磨

称取30g洋葱，切碎，然后放入研钵中，倒入10mL研磨液，充分研磨

①研磨的目的？

破碎细胞，使核物质容易溶解在研磨液中

2.过滤或离心取上清液

在漏斗中垫上纱布，将洋葱研磨液过滤到烧杯中，在4℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液。

也可直接将研磨液倒入塑料离心管中，1500r/min的转速下离心5min，再取上清液放入烧杯中。

①上清液中除DNA之外，可能含有哪些杂质？

可能含有核蛋白、多糖等杂质

②低温放置几分钟的作用？可抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解;3.预冷酒精析出DNA或离心收集沉淀中的DNA

在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液(体积分数为95%)，静置2-3min，溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分；

或将溶液倒入塑料离心管中，在10000r/min的转速下离心5min，弃上清液，将管底的沉淀物(粗提取的DNA)晾干。

①搅拌时应轻缓、并沿一个方向？

减少DNA断裂，以便获得较完整的DNA分子

②酒精预冷的作用？

同“低温放置的作用”;4.NaCl溶液溶解DNA并鉴定

取两支20mL的试管，各加入2mol/L的NaCl溶液5mL。将丝状物或沉淀物溶于其中一支试管的NaCI溶液中。向两支试管中各加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min。待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化。

;思考：1．鸟类和哺乳动物的红细胞都适合用来提取DNA吗？请说明理由。

2．实验过程要充分地搅拌和研磨，如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？;巩固练习1.判断：

(1)限制性内切核酸酶均能特异性地识别6个核苷酸序列。()

(2)DNA连接酶能将两